[发明专利]采用EST-SSR标记进行莲品种真伪和/或纯度鉴定的方法

权利要求书

1.采用EST-SSR标记进行莲品种真伪和/或纯度鉴定的引物，其特征在于：为序列如下所示的6对引物：

标记NL-28正向引物：CATGTGTGCCTAAACATGCC，

标记NL-28反向引物：TGTGCTTCGCTAGCAAAATG；

和：

标记NL-P8正向引物：CTTCGCAGAGTTCATCCACA，

标记NL-P8反向引物：TCTTGTCAGGCTAACGCAAG；

和：

标记NL-35正向引物：TTGGGAAACAATCAGAAGGG，

标记NL-35反向引物：TGCAAAATAAAAACCTGGGG；

和：

标记NL-1正向引物：GCTGACTGCTGAGCCTTTCT，

标记NL-1反向引物：AATGCCTGAAACTTCGATGG；

和：

标记NL-P9正向引物：AACTGCGTTAGAAGGCAAGG，

标记NL-P9反向引物：TTCATGCTCCAAATGCTCTG；

和：

标记NL-47正向引物：ACCGTGGAAGTGGAAAGTTG，

标记NL-47反向引物：AAGTAGCCGACCTGATCGAA。

2.一种采用EST-SSR标记进行莲品种真伪和/或纯度鉴定的方法，其特征在于包括如下步骤：以待检莲样品的基因组DNA作为模板，利用微卫星标记NL-28、NL-P8、NL-35、NL-1、NL-P9和NL-47的引物进行PCR扩增，构建指纹图谱，根据指纹图谱进行莲品种真伪鉴定和/或纯度检验；各微卫星标记引物序列如权利要求1所述；

标记NL-28引物扩增的多态性片段包括261bp、259bp和257bp三个片段；标记NL-P8引物扩增的多态性片段包括187bp、165bp和156bp三个片段；标记NL-35引物扩增的多态性片段包括162bp、160bp和158bp三个片段；标记NL-1引物扩增的多态性片段包括251bp、245bp和242bp三个片段；标记NL-P9引物扩增的多态性片段包括185bp、183bp和180bp三个片段；标记NL-47引物扩增的多态性片段包括277bp、274bp、249bp和225bp四个片段。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)提取待检莲叶片基因组DNA；

(2)以上述基因组DNA为模板，利用各微卫星标记引物进行PCR扩增，并对扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据电泳的结果将各引物扩增的多态性片段统计成二进制数据，扩增出相应片段为1，没有扩增出相应片段为0；按照如下顺序：标记NL-28引物扩增的多态性片段261bp、259bp、257bp，标记NL-P8引物扩增的多态性片段187bp、165bp、156bp，标记NL-35引物扩增的多态性片段162bp、160bp、158bp，标记NL-1引物扩增的多态性片段251bp、245bp、242bp，标记NL-P9引物扩增的多态性片段185bp、183bp、180bp，标记NL-47引物扩增的多态性片段277bp、274bp、249bp、225bp，将是否扩增到相应片段转换为二进制数据1或0，所得到的二进制数据结合到一起组成莲的19位二进制分子身份证；将待检莲的二进制分子身份证与已知莲品种的二进制分子身份证进行比对达到莲品种真伪和/或纯度鉴定的目的。

4.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于包括如下步骤：寸三莲、芙蓉莲、白湘莲、红湘莲、处州白莲、土萱莲、白花建莲、红花建莲、百叶莲、京广2号、星空牡丹、舞妃莲、桌上莲、建德红花莲、逸仙莲、秋水长天、重台莲、冬瓜莲、太空莲36号、日杂3号、武植2号的19位二进制分子身份证分别为：1001010011010101000、1001010010011001100、1001010100011001100、1001010100111000100、0100010010011101000、0101010010011001000、0101010010011101000、0101000011000100010、0011010100011001010、0011010010011001010、0101000101000100010、0011100101100110011、0011000101010101010、0010010100010101000、0010110100110100011、0011011001010001010、0011010101010111010、0010011000011001100、0011000100011001010、0011000100011011000、0011010011000100010。