[发明专利]一种培养Marc-145细胞用的无血清培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种培养Marc-145细胞用的无血清培养基，其特征在于：包括基础培养基，还包括如下组分：胰岛素样生长因子0.1~10μg/mL、表皮生长因子5~20μg/mL、成纤维生长因子0.1~10μg/mL、转铁蛋白5~20μg/mL、亚硒酸钠20~30μg/mL、小麦蛋白酶解物1~5mg/mL、1~5%体积百分比的酶解明胶溶液和乙醇胺10~20μg/mL。

2.根据权利要求1所述的培养Marc-145细胞用的无血清培养基，其特征在于：包括基础培养基，还包括如下组分：胰岛素样生长因子5μg/mL、表皮生长因子10μg/mL、成纤维生长因子8μg/mL、转铁蛋白15μg/mL、亚硒酸钠25μg/mL、小麦蛋白酶解物4mg/mL、2%体积百分比的酶解明胶溶液和乙醇胺15μg/mL。

3.根据权利要求1所述的培养Marc-145细胞用的无血清培养基，其特征在于：所述的基础培养基选自DMEM培养基、MEM培养基和F12培养基中的一种或两种。

4.根据权利要求3所述的培养Marc-145细胞用的无血清培养基，其特征在于：所述的基础培养基包括DMEM培养基和F12培养基，其体积比为1：1。

5.根据权利要求1所述的培养Marc-145细胞用的无血清培养基，其特征在于：所述酶解明胶溶液为胰酶酶解明胶溶液，所述PBS溶液用超纯水配制而成。

6.一种根据权利要求1所述的培养Marc-145细胞用的无血清培养基的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括如下步骤：

S1：制备小麦蛋白酶解物；

S2：制备酶解明胶溶液；

S3：向基础培养基中，按所述浓度加入胰岛素样生长因子、表皮生长因子、成纤维生长因子、转铁蛋白、亚硒酸钠、小麦酶解植物蛋白、酶解明胶溶液和乙醇胺，混匀，过膜除菌即得培养基。

7.根据权利要求6所述的培养Marc-145细胞用的无血清培养基的制备方法，其特征在于：所述小麦蛋白酶解物的制备方法包括如下步骤：取小麦蛋白粉，加入其重量15~20倍量纯化水，搅拌均匀，混悬液中加入8~10mol/LHCL调节溶液pH值为2.0~4.0，加入1200~1800U/g的酶，35~45℃下酶解6~10h，用1~2mol/LHCL或NaOH保持溶液pH值不变，酶解结束后95℃灭酶15~20min，冷却后离心取上清液，减压浓缩，减压干燥，即得小麦蛋白酶解物。

8.根据权利要求7所述的培养Marc-145细胞用的无血清培养基的制备方法，其特征在于：所述的酶解小麦蛋白的酶选自胃蛋白酶、胰蛋白酶、酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶中的一种或多种。

9.根据权利要求8所述的培养Marc-145细胞用的无血清培养基的制备方法，其特征在于：所述的酶解小麦蛋白的酶为胃蛋白酶。

10.根据权利要求6所述的培养Marc-145细胞用的无血清培养基的制备方法，其特征在于：所述酶解明胶溶液的制备方法包括如下步骤：

S1：将明胶溶解在PBS溶液中，得到明胶PBS溶液，所述明胶PBS溶液的质量体积浓度为200-400mg/mL；

S2：将S1得到的明胶PBS溶液进行湿热高压灭菌处理，所述湿热高压灭菌处理的温度为121℃、压力为103.4KPa、时间为20min；

S3：将经S2处理后的明胶PBS溶液冷却至常温，加入其体积0.5~2%的质量百分浓度为0.25％的胰酶溶液，在37℃温度下酶解24~36h；

S4：将经S3处理后的明胶PBS溶液冷却至2-8℃，如出现凝固现象，则重复S3步骤，直至在2-8℃时无凝固现象出现，得到酶解明胶溶液。