[发明专利]一种肠膜明串珠菌的水不溶性胞外多糖及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种肠膜明串珠菌的水不溶性胞外多糖及其制备方法。

背景技术

水不溶性葡聚糖(Insolubleglucan，IG)是一类不溶于水溶液、以葡萄糖为单一组分聚合而成的一种糖类多聚物，这类理化性质特殊的碳水化合物不但来源广泛，在植物、真菌以及细菌的代谢产物中均有报道，而且种类繁多。目前报道较多的IG有dextran、curdlan和cellulose三种，从结构特点来看，已报道的这些IG的分支仅由α-(1,2)、α-(1,3)或α-(1,4)糖苷键中的一种将支链与主链连接起来，极少涉及2种或以上糖苷键的分支结构。因此，新构型IG的筛选与发现不仅为IG家族增添了新的成员，而且极大地推动了IG结构有关研究的前沿领域。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是当前水不溶性多糖来源狭隘，支链与主链的连接结构糖苷键类型单一，制备方法繁琐，用于制备的菌种为有害菌等问题，本发明提供了一种肠膜明串珠菌的水不溶性胞外多糖及其制备方法。

本发明人发现保藏号为CGMCCNo.10064的肠膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)BD3749在合成培养基中培养后得到的发酵液制备可得具有特殊结构的水不溶性胞外多糖，由此发明人完成了本发明。

为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之一为：一种肠膜明串珠菌的水不溶性胞外多糖，所述的水不溶性胞外多糖为一种主链由α-(1,6)糖苷键连接而成，支链由α-(1,3)和α-(1,4)糖苷键连接而成的葡聚糖，其中，糖苷键α-(1,6)∶α-(1,3)∶α-(1,4)的摩尔比例为1∶0.2～0.3∶0.3～0.4。

所述水不溶性胞外多糖为一种同时拥有α-(1,3)和α-(1,4)糖苷键的水不溶性葡聚糖，较佳地呈白色粉末状。

所述的水不溶性胞外多糖较佳地由保藏编号为CGMCCNo.10064的肠膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)BD3749产生。

如前所述肠膜明串珠菌的水不溶性胞外多糖可以由下述制备方法制备而得。

为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之二为：一种肠膜明串珠菌的水不溶性胞外多糖的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

1)将肠膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)BD3749接种于培养基中，发酵培养获得发酵液；

2)将步骤1)所得发酵液冷冻干燥后，取冻干粉末用碱液浸提，取上清，调节pH至7，取沉淀，冷冻干燥即得。

本发明步骤1)为：将肠膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)BD3749接种于培养基中，发酵培养获得发酵液。

本发明制备方法中所述的肠膜明串珠菌BD3749已于2014年11月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101。该菌株的建议的分类命名为：肠膜明串珠菌Leuconostocmesenteroides，该菌株的保藏编号为：CGMCCNo.10064，所保藏的培养物名称为：BD3749。

本发明所述肠膜明串珠菌BD3749的制备方法为常规的，较佳地还包括该肠膜明串珠菌BD3749活化获得肠膜明串珠菌种子的步骤。所述肠膜明串珠菌种子为常规方法获得，较佳地为包括以下步骤的方法：将肠膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)BD3749的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于含5％蔗糖的M17固体培养基(购买自OXOID，英国)，30℃好氧培养48h取出，用接种环挑取单菌落放入10mL含5％蔗糖的M17液体培养基(购买自OXOID，英国)，运用涡旋振荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，30℃，180rpm振荡培养24h取出，以2％(v/v)接种量接种于含5％蔗糖的M17液体培养基(购买自OXOID，英国)，30℃，180rpm振荡培养24h后，将培养物15,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子(亦称肠膜明串珠菌种子液)。所述肠膜明串珠菌BD3749的冻干粉由以下方法制备：挑取2个菌落，接种于300mL的10％(w/w)的脱脂乳溶液里30℃培养4h，-80℃预冻过夜，-20℃冷冻干燥。