[发明专利]用于鉴别阳澄湖大闸蟹的方法及试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于鉴别阳澄湖大闸蟹的方法及试剂盒，该方法包括(1)提取待鉴别的大闸蟹肠道中微生物全基因组DNA，得到DNA模板；(2)聚合酶链式反应，以扩增大闸蟹肠道微生物的16S rDNA序列；(3)PCR产物进行电泳，将PCR产物的电泳图谱与阳澄湖大闸蟹特有细菌的电泳图谱进行比较，若PCR产物的电泳图谱与阳澄湖大闸蟹的任一种特有细菌电泳图谱相一致，则该大闸蟹为阳澄湖大闸蟹。试剂盒包括PCR特异引物、10×PCR缓冲液、4种dNTP混合物、TaqDNA聚合酶及阳澄湖大闸蟹特有细菌的电泳图谱。本发明的方法和试剂盒可以快速地鉴别阳澄湖饲养的大闸蟹，使用方便，成本小且准确率高，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种用于鉴别不同产地中华绒螯蟹的方法，更具体涉及一种基于肠道特征微生物鉴别阳澄湖产地与其他产地饲养的长江水系中华绒螯蟹(大闸蟹)的方法及试剂盒。

背景技术

中华绒鳌蟹(Eriocheir sinensis)是一种重要的经济蟹类，又称河蟹、螃蟹、清水蟹、毛蟹和大闸蟹，自然分布于亚洲北部、朝鲜西部和中国的大部分地区。在中国的分布北至辽宁鸭绿江口，南至福建九龙江，西到湖北宜昌的三峡口。因栖息生态环境的不同，中华绒鳌蟹形成了长江水系、辽河水系、瓯江水系、闽江水系、黄河水系、海河水系等6个不同种群。不同水系的中华绒鳌蟹，其生长的地域性特征非常明显，一旦离开了原来的生长水系，生长发育变得明显缓慢，甚至难以存活。

长江水系是我国传统优质中华绒鳌蟹的主产地，其中最著名的是长江下游的江苏省苏州市内的阳澄湖。随着人工培育蟹苗技术的快速发展，以及中华绒鳌蟹增殖放流的力度及范围扩大。目前，长江水系中华绒鳌蟹在长江中下游地区的江苏、上海、安徽、湖北等省市有广泛养殖，但其品质有差异，仍以阳澄湖产的中华绒鳌蟹最受市场追捧。

阳澄湖因得天独厚的自然条件，出产的中华绒鳌蟹被誉为“蟹中之王”，自古受到国人钟爱，在港澳台地区和东南亚国家也享有盛誉。商品市场上，阳澄湖产中华绒鳌蟹家喻户晓的名称是阳澄湖大闸蟹，简称大闸蟹。

由于阳澄湖湖区面积所限，以及水源地保护的要求，阳澄湖大闸蟹的产量已经非常有限，目前仅占全国中华绒鳌蟹年产量的0.3％。另一方面，由于阳澄湖大闸蟹的知名度、品牌美誉度高，导致阳澄湖大闸蟹的市场需求量远远大于实际产量，各种假冒阳澄湖大闸蟹的产品也层出不穷。在众多的假冒蟹中，又以“进修蟹”和“洗澡蟹”为典型。所谓“进修蟹”，是指将阳澄湖以外地区饲养，或者阳澄湖地区池塘饲养的长江水系中华绒鳌蟹在阳澄湖里饲养很短时间，因此也称“暂养蟹”；所谓“洗澡蟹”则是在出售前将上述阳澄湖以外地区饲养长江水系中华绒鳌蟹放到阳澄湖里过一趟水。这些非阳澄湖产中华绒鳌蟹由于最终是从阳澄湖捕捞上来，因此容易冒充正宗“阳澄湖大闸蟹”。“进修蟹”和“洗澡蟹”的品质与从小在阳澄湖饲养长大的大闸蟹有很大差异。因此，提供一种快速有效判别阳澄湖产大闸蟹的方法，具有巨大的应用前景，对于保护原产地蟹农和消费者利益具有直接帮助。

目前，市场上判别阳澄湖产大闸蟹的主要方法是依靠经验丰富的饲养或经营、管理人员，通过观察蟹的形态特征评判是否为阳澄湖大闸蟹。然而，由于“进修蟹”和“洗澡蟹”也使用阳澄湖大闸蟹相同的长江水系中华绒鳌蟹蟹苗，因此它们的形态特征判别犹如从外形识别多胞胎，准确率难以保证。市场上还通过给蟹背打上激光标记，或者在蟹腿扣上防伪塑料扣环的方法来标识阳澄湖大闸蟹。由于这两种防伪标记方法本身不具有区别蟹产地的功能，而且激光标记或塑料扣环很易被仿制。另一方面，正宗的激光标记或塑料扣环一旦用于仿冒蟹，反而使其更具欺骗性。已有专利技术(专利公开号：CN101923069A、CN101923069B)使用质谱仪检测蟹背甲左侧第三步足的微量元素钠、镁、铝、钾、锰、铁、铜、锶、钡和铊的含量，来区别不同地区生产的中华绒螯蟹群体。该方法的测定技术要求高、成本较大，目前阳澄湖大闸蟹的生产和销售市场上几乎没有应用该技术。