[发明专利]用于鉴定安吉小鲵的多重PCR引物和方法及应用有效
| 申请号： | 201510970193.8 | 申请日： | 2015-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN105441547B | 公开（公告）日： | 2018-11-20 |
| 发明（设计）人： | 晏鹏;王明胜;吴孝兵 | 申请（专利权）人： | 安徽师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京润平知识产权代理有限公司 11283 | 代理人： | 张苗;罗攀 |
| 地址： | 241002 安徽省芜*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 多重PCR引物 琼脂糖凝胶电泳检测 引物 特异性鉴定 蝌蚪 繁琐步骤 序列比对 一次PCR 成体 扩增 卵带 应用 检测 | ||
1.一种用于鉴定安吉小鲵(Hynobius amjiensis)的多重PCR引物，其特征在于，所述多重PCR引物包括如SEQ ID No：1和SEQ ID No：2所示的引物对1，以及如SEQ ID No：3和SEQID No：4所示的引物对2。
2.一种利用多重PCR鉴定安吉小鲵(Hynobius amjiensis)的方法，其特征在于，所述方法包括：
1)提取待测样品的总DNA；
2)采用根据权利要求1所述的多重PCR引物对步骤1)中提取的总DNA进行PCR扩增；
3)将步骤2)中得到的产物进行琼脂糖凝胶电泳检测；其中，
在步骤3)中所得到的琼脂糖凝胶电泳图中，若含有步骤2)中得到的产物的泳道中出现DNA片段的长度分别为150bp和425bp的条带，则判断所述待测样品为来自安吉小鲵的样品，若含有步骤2)中得到的产物的泳道中不出现上述2条条带，则判断所述待测样品不是来自安吉小鲵的样品。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，相对于30μL的PCR扩增体系的总体积，每条引物的浓度为0.2-0.5pmol/L，DNA模板的用量为40-60ng。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其中，所述PCR扩增过程的变性温度为92-98℃，变性时间为35-45s。
5.根据权利要求2或3所述的方法，其中，所述PCR扩增过程的退火温度为55-60℃，退火时间为25-35s。
6.一种根据权利要求1所述的多重PCR引物或权利要求2-5任意一项所述的方法在鉴定安吉小鲵(Hynobius amjiensis)中的应用。
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