[发明专利]一种灵芝菌种提纯复壮的方法

权利要求书

1.一种灵芝菌种提纯复壮的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)菌种的初次筛选培养：采用三代及三代以内的健壮的灵芝个体组织分离提取母种，以琼脂或小米配合马铃薯为培养基，常规斜面培养10～15天，再置于超低温-80～-50℃保藏；

(2)第二次培养：选取步骤(1)培养的灵芝菌种，以小米粉与栎树(Quercus Linn)叶汁为培养基，常规斜面培养10～15天，再进行超低温保藏；

(3)第三次培养：选取步骤(2)培养的灵芝菌种，以小米粉与栎树叶粉为培养基，常规斜面培养10～15天，再进行超低温保藏；

(4)第四次培养：选取步骤(3)培养的灵芝菌种，以栎树叶粉、Vb1和水为培养基，常规斜面培养，当菌丝生长满试管时停止培养，再进行超低温保藏；

(5)扩展原种：选取步骤(4)培养的灵芝菌种，以含栎树木屑与麦麸或米糠的混合物为培养基，使用广口瓶、棉塞常规培养18～25天，然后更换棉塞为四层医用纱布封罩瓶口，继续培养10～20天并保藏；

(6)扩转生产种：选取步骤(5)培养的灵芝菌种，以含栎树木屑与麦麸或米糠的混合物为培养基，经蒸汽灭菌、分袋、接种，并加扎外袋罩护，常规培养，当接种孔发菌直径8～10cm后覆膜去外罩护袋，继续常规培养，一共培养30～40天并保藏；

(7)应用生产：将步骤(6)培养的灵芝菌种用于车间规模化生产。

2.根据权利要求1所述一种灵芝菌种提纯复壮的方法，其特征在于，所述步骤(2)第二次培养所用的培养基组分质量比为小米粉：栎树叶汁＝(2.6～3.5):l。

3.根据权利要求2所述一种灵芝菌种提纯复壮的方法，其特征在于，所述步骤(2)第二次培养所用的培养基组分质量比为小米粉：栎树叶汁＝3:l。

4.根据权利要求1所述一种灵芝菌种提纯复壮的方法，其特征在于，所述步骤(3)第三次培养所用的培养基组分质量比为小米粉：栎树叶粉＝(0.5～1.5):l。

5.根据权利要求4所述一种灵芝菌种提纯复壮的方法，其特征在于，所述步骤(3)第三次培养所用的培养基组分质量比为小米粉：栎树叶粉＝1:l。

6.根据权利要求1所述一种灵芝菌种提纯复壮的方法，其特征在于，所述步骤(4)第四次培养所用的培养基的质量组分为：栎树叶粉800～1200份、Vb10.03～0.07份、水1300～1700份。

7.根据权利要求6所述一种灵芝菌种提纯复壮的方法，其特征在于，所述步骤(4)第四次培养所用的培养基的质量组分为：栎树叶粉1000份、Vb1 0.05份、水1500份。

8.根据权利要求1所述一种灵芝菌种提纯复壮的方法，其特征在于，所述步骤(1)、步骤(2)、步骤(3)中使用试管、棉塞常规斜面培养，当菌丝离试管底端距离为3～7mm时停止培养。

9.根据权利要求1所述一种灵芝菌种提纯复壮的方法，其特征在于，所述步骤(5)中使用广口瓶、棉塞常规培养，当培养发菌至广口瓶中一半时换棉塞为四层医用纱布封罩瓶口，继续培养，当广口瓶中菌丝发满时，停止培养并保藏。

10.根据权利要求1所述一种灵芝菌种提纯复壮的方法，其特征在于：所述步骤(5)扩展原种、步骤(6)扩转生产种所用的培养基的质量组分为：栎树木屑700～750份、麦麸或米糠220～280份、黄豆粉15～25份、石膏8～13份、水1100～1300份。