[发明专利]一种人免疫球蛋白制品中Tau蛋白抗体含量的检测方法

权利要求书

1.一种人免疫球蛋白制品中Tau蛋白抗体含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤:

A.抗原包被：在酶标板的每孔中加入Tau蛋白溶液，经孵育操作后用洗涤液洗涤；

B.封闭：在所述酶标板的每孔中加入无蛋白封闭液，经孵育操作后用洗涤液洗涤；

C.一抗孵育：在所述酶标板的每孔中加入待测样品，经孵育操作后用洗涤液洗涤；所述待测样品为用稀释液稀释的人免疫球蛋白制品，所述稀释液为采用去免疫球蛋白G的牛血清白蛋白和磷酸钠-吐温缓冲液配制的混合液，所述稀释液中的去免疫球蛋白G的牛血清白蛋白的质量含量为0.5％-1.5％；

D.二抗孵育：在所述酶标板的每孔中加入生物素偶联的抗一抗的抗体，经孵育操作后用洗涤液洗涤；

E.酶标三抗孵育：在所述酶标板的每孔中加入标记酶偶联的链抗生物素蛋白，经孵育操作后用含有NaCl和Tween-20的Tris-HCl缓冲液洗涤；

F.吸光度检测及含量计算：在所述酶标板的每孔中加入显色底物进行显色反应，经孵育操作后再加入终止液终止反应，然后将所述酶标板放入检测装置中进行吸光度检测，得待测样品的吸光度值OD_待测样品，并采用标准曲线法计算出待测样品中的Tau蛋白抗体的含量。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述生物素偶联的抗一抗的抗体为生物素偶联的免疫球蛋白G的Fc片段的抗体，所述生物素偶联的免疫球蛋白G的Fc片段的抗体为来源于其他物种的针对于人免疫球蛋白G的Fc片段的抗体与生物素偶联后形成的抗体。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述生物素偶联的免疫球蛋白G的Fc片段的抗体为生物素偶联的羊抗人免疫球蛋白G的Fc片段的抗体、生物素偶联的兔抗人免疫球蛋白G的Fc片段抗体或者生物素偶联的鼠抗人免疫球蛋白G的Fc片段抗体。

4.根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述Tau蛋白溶液的浓度为5-20μg/ml；所述洗涤液为磷酸盐缓冲液；所述Tris-HCl缓冲液的浓度为0.01-0.02mol/L，其含有的NaCl的浓度为0.1-0.2mol/L，Tween-20的质量百分含量为0.05％-0.2％。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述标记酶为碱性磷酸酶，所述显色底物为对硝基苯磷酸二钠，所述终止液为强碱溶液，所述吸光度检测是检测酶标板在波长405nm的吸光度值；或者所述标记酶为辣根过氧化物酶，所述显色底物为双氧水与四甲基联苯胺或者双氧水与邻笨二胺，所述终止液为强酸溶液，所述吸光度检测是检测酶标板在波长450nm或492nm的吸光度值。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述洗涤液和所述Tris-HCl缓冲液的洗涤次数均分别为3-5次。

7.根据权利1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，所述孵育操作的孵育温度为4-37℃，孵育时间为5min-16h。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述孵育操作的孵育温度为25℃，孵育时间为8min-4h。

9.根据权利要求1-3任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤F中的所述标准曲线法包括以下步骤：

溶液配制：将标准品用稀释液进行梯度稀释，得到不同浓度的标准品溶液；

标准曲线绘制：根据所述检测方法分别测定所述不同浓度的标准品溶液经检测反应后的吸光度值OD_标准品，再以OD_标准品的值对标准品中Tau蛋白浓度值绘制标准曲线并获得曲线方程；

结果计算：将测得的所述待测样品的吸光度值OD_待测样品代入曲线方程计算待测样品中Tau蛋白抗体含量。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述标准品为鼠抗人Tau蛋白单克隆抗体，且所述标准曲线绘制中，所用的生物素偶联的抗一抗的抗体为生物素偶联的羊抗鼠免疫球蛋白G的Fc片段的抗体或者生物素偶联的兔抗鼠免疫球蛋白G的Fc片段的抗体。