[发明专利]一种人免疫球蛋白制品中Tau蛋白抗体含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药检测技术领域，具体而言，涉及一种人免疫球蛋白制品中Tau蛋白抗体含量的检测方法。

背景技术

Tau蛋白是与阿尔兹海默症相关的一种重要蛋白。人静脉注射免疫球蛋白(intravenousimmunoglobulin，IVIG)是临床用于一种治疗免疫缺陷的药物，含多种抗体。同时，有研究者发现静脉注射人免疫球蛋白制品能够治疗阿尔兹海默症，其作用机理可能与免疫球蛋白中含有的Tau蛋白抗体有关。

IVIG若用于阿尔兹海默症的治疗，其中的Tau蛋白抗体含量的多少将是与其治疗阿尔兹海默症效果相关的重要指标，因此，有必要对IVIG中Tau蛋白抗体含量进行检测。

由于IVIG是以数千人份混合血浆为原料制备的血浆蛋白制品，因此其具有非常丰富的抗体多样性，包含成千上万种蛋白、多肽、核酸甚至小分子物质的IgG抗体，能够与多种成分发生抗原抗体反应，而单一一种抗体的含量也较少。常规的酶联免疫吸附实验中用到的封闭液、稀释液中，常含有各种复杂成分，会与待测样品发生交叉反应而影响检测方法的准确性；同时，因免疫球蛋白中的Tau蛋白抗体含量较低而不易检测，也会对检测方法的准确性产生影响。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种人免疫球蛋白制品中Tau蛋白抗体含量的检测方法，以提高检测方法的准确性。

本发明所采用的技术方案为:

一种人免疫球蛋白制品中Tau蛋白抗体含量的检测方法，包括以下步骤:

A.抗原包被：在酶标板的每孔中加入Tau蛋白溶液，经孵育操作后用洗涤液洗涤；

B.封闭：在所述酶标板的每孔中加入无蛋白封闭液，经孵育操作后用洗涤液洗涤；

C.一抗孵育：在所述酶标板的每孔中加入待测样品，经孵育操作后用洗涤液洗涤；所述待测样品为用稀释液稀释的人免疫球蛋白制品，所述稀释液为采用去免疫球蛋白G的牛血清白蛋白和磷酸钠-吐温缓冲液配制的混合液，所述稀释液中的去免疫球蛋白G的牛血清白蛋白的质量含量为0.5％-1.5％；

D.二抗孵育：在所述酶标板的每孔中加入生物素偶联的抗一抗的抗体，经孵育操作后用洗涤液洗涤；

E.酶标三抗孵育：在所述酶标板的每孔中加入标记酶偶联的链抗生物素蛋白，经孵育操作后用含有NaCl和Tween-20的Tris-HCl缓冲液洗涤；

F.吸光度检测及含量计算：在所述酶标板的每孔中加入显色底物进行显色反应，经孵育操作后再加入终止液终止反应，然后将所述酶标板放入检测装置中进行吸光度检测，得待测样品的吸光度值OD_待测样品，并采用标准曲线法计算出待测样品中的Tau蛋白抗体的含量。

上述检测方法中，通过采用无蛋白封闭液而避免了因封闭液中的蛋白质与待测样品中的多元抗体发生非特异性结合而影响检测结果；同时，采用去免疫球蛋白G的牛血清白蛋白和磷酸钠-吐温缓冲液配制的混合液作为稀释液，避免了因稀释液中的牛血清白蛋白中残留的IgG分子与检测体系发生交叉反应而影响检测结果，因此，提高了检测方法的准确度。

同时，为了避免因待测样品中Tau蛋白抗体的含量较少而不易测量的问题，上述检测方法中，通过步骤C、步骤D和步骤E，使得吸附于酶标板上的Tau蛋白首先与步骤C中作为一抗的待测样品中的Tau蛋白抗体发生特异性结合形成一抗复合物，即抗原抗体复合物。然后该一抗复合物又与步骤D中作为二抗的生物素偶联的抗体特异性结合形成二抗复合物；最后该二抗复合与步骤E中作为三抗的标记酶偶联的链抗生物素蛋白特异性结合形成标记酶偶联的三抗复合物，通过步骤D和步骤E的生物素放大系统对待测样品中的Tau蛋白抗体的检测信号进行了放大而使其与显示底物反应后易于被检测，提高了该检测方法的准确性。

再者，上述步骤A、B、C、D和E均具有洗涤操作，这样可以及时洗去各步骤中酶标板上的游离成分和其他杂质蛋白，以免其影响检测结果的准确性。

因此，该检测方法能够更准确地测定人免疫球蛋白制品中Tau蛋白抗体含量。

其中，优选地，所述稀释液中的去免疫球蛋白G的牛血清白蛋白的质量含量为1％

进一步，所述生物素偶联的抗一抗的抗体为生物素偶联的免疫球蛋白G的Fc片段的抗体，所述生物素偶联的免疫球蛋白G的Fc片段的抗体为来源于其他物种的针对于人免疫球蛋白G的Fc片段的抗体与生物素偶联后形成的抗体。