[发明专利]小蝉草菌丝体及胞外多糖液体发酵的生产方法

权利要求书

1.一种小蝉草 (Cordyceps sobolifera) 菌丝体及胞外多糖的液体培养方法，其特征包括以下的步骤：

第一步：将小蝉草接种在PDA培养基上，20-25℃下进行暗培养，使菌落直径长至4-6cm，得到斜面菌种；

第二步：第一步得到的斜面菌种，在经灭菌的研钵里，加入适量无菌水进行研磨，接种至液体种培养基，20-28℃下振荡培养，培养7-10天，至菌丝球充满全部培养基，得到液体菌种，所述的液体种培养基pH6.0-6.5，每1000 mL培养基中含有葡萄糖10-20 g，蛋白胨1-5g，牛肉浸膏1-4 g，酵母浸膏0.5-1 g；

第三步：将第二步得到的液体菌种接种到液体培养基进行液体培养，所述的液体培养基pH5.0-8.5，每1000 mL培养基中含有葡萄糖10-20 g，蛋白胨1-5 g，牛肉浸膏1-4 g，酵母浸膏0.5-1 g，其余为水；

第四步：第三步的液体培养采用振荡培养或搅拌培养，振荡培养方式：将第二步中的液体菌种按接种量5%-15%（V/V）的比例，接种至液体培养基，100-180 r/min，培养4-7天，至菌丝球充满全部培养基，搅拌培养：按比例接入适量的液体菌种后，利用磁力搅拌器进行培养，培养室温度设置为20-28℃下，培养时间4-7天；

第五步：将第四步中的培养物进行菌丝体和培养液的分离，采用离心法或过滤法收集菌丝，湿菌丝得率为70-100 g/L；在40-60℃下烘干菌丝，干菌丝产率5-8 g/L；离心得的上清液或过滤得的滤液直接加入适量酒精进行多糖沉淀，或进行浓缩后再进行多糖沉淀，最后利用离心的方法收集多糖，多糖经40-50℃下烘干或冷冻干燥，得率为0.5-1.2 g/L。

2.根据权利要求1所述的一种小蝉草 (Cordyceps sobolifera) 菌丝体及胞外多糖的液体培养方法，其特征是第一步所述的暗培养时间是20-30天，第二步所述的振荡培养是120-180 r/min，培养时间是7-10天，第三步所述的液体培养基占容器体积分数是10%-60%，第四步所述的搅拌培养的搅拌速度是120-200 r/min。