[发明专利]小蝉草菌丝体及胞外多糖液体发酵的生产方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种小蝉草菌丝体及胞外多糖液体发酵的生产方法。以一种小蝉草菌种为出发菌株，通过液体深层发酵，获得菌丝体和胞外多糖。斜面试管菌种于无菌条件下经研磨后，接入液体培养基中制备成液体菌种，再用于液体深层发酵，经过振荡培养或搅拌培养后，获得培养物，利用离心或过滤等方法分离菌丝体和培养液，可获得菌丝体（干重）5‑8 g/L。培养液经超滤或乙醇沉淀后获得胞外多糖，得率为0.5‑1.2g/L。利用以上工艺可进行小蝉草菌丝体和胞外多糖的生产，具有较高的开发价值。

技术领域

本发明涉及大型真菌液体发酵培养技术领域，小蝉草(Cordyceps sobolifera)菌丝体及胞外多糖的液体发酵生产方法。

背景技术

传统医学与现代科学研究都表明，虫草拥有极高的保健作用和药用价值，具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、滋阴壮阳、保肝益肺和提高免疫力等功效。因而越来越受到人们的喜爱，市场需求不断扩大。虫草是一类寄生于昆虫体上的真菌与其寄主昆虫形成的虫菌复合体，分类学上隶属于子囊菌门(Ascomycota )、核菌纲(Pyenomycetes )、麦角菌科(Clavicipitaceae )、虫草属(Cordyceps)。至今为止，世界上已知的虫草有500多种，我国已知种类有130种，如：蛹虫草（C. militaris）、台湾虫草（C. formosana）、古尼虫草（C. gunnii）、凉山虫草（C. liangshanensis）、江西虫草(C. jiangxiensis)、巴恩斯虫草(C. barnesis)虫草等种类，不少种类补发现具有类似于冬虫夏草的化学成分及药理作用，可作为冬虫夏草的替代品加以开发。由于冬虫夏草生长要求严苛，子实体人工培育仍停留在试验阶段，其菌丝体可进行规模化发酵生产，但因周期长等因素，导致产品价格（百令胶囊）居高不下。目前，除了蛹虫草子实体可进行商业性规模化生产外，其他虫草种类多处于研究阶段。

小蝉草（C. sobolifera），又名小蝉花或土蝉花，根据《 证类本草》记载，小蝉草主产广东和福建，同作传统中药“蝉花”入药。由于使用习惯和资源分布等原因，小蝉草一直未被真正关注，其研究多集中在分类鉴定。幸兴球（1975）明确小蝉草和大蝉草（C. cicadae）是分类学上两个不同的种。梁宗琦（2007）在《真菌志•虫草属》中也同意这一观点。此外，该文献中对小蝉草的人工培养进行了初步的描述：在PDA上菌落生长缓慢，23^oC培养56天，直径仅有25-30mm。这一培养特性明显区别于大蝉草，大蝉草在PDA上25 ^oC培养14天，菌落直径达80mm(刘爱英 2012)。因此，根据两者在生物学上，特别是生长速度的差异，可确定目前有关“蝉花”（部分使用C. sobolifera的学名）的报道大部分实际上为大蝉花（C. cicadae），但对小蝉草液体培养的研究未见报道。小蝉草具有与大蝉草相似的药用价值，统作“蝉花”一起收购和销用。发明人自江苏南京紫金山采集分离得一株小蝉草菌种，经形态和分子鉴定，确定其为小蝉草。本发明利用此菌种进行液体培养，获得的菌丝体可用于功能食品等开发。

发明内容

本发明的目的是提供一种小蝉草菌丝体及胞外多糖的液体培养方法。

本发明通过如下步骤来实现：

1、母种培养

将斜面菌种接种在PDA培养基上，20-28^oC下暗培养20-30天，菌落直径长至4-6cm。

2、液体菌种的制备