[发明专利]一种脂肪体的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种制备由中性脂质和单层磷脂膜组成的脂肪体的方法，包括下述步骤：

a1）将磷脂和中性脂质在缓冲液中进行涡旋 以实现两者的反应，然后进行离心，收集上层液相，从上层液相中分离得到脂肪体；

所述“从上层液相中分离得到脂肪体”包括如下步骤：

a2）将所述上层液相进行两次以上的纯化；每次纯化的方法为：将上层液相与所述缓冲液混匀，然后使其分层，收集上层液相；

a3）将步骤a2）得到的上层液相与所述缓冲液混合，然后使其分层，收集下层液相，其中含有脂肪体；

所述步骤a2）中，所述“使其分层”是通过离心实现的，所述离心的参数为：18000～22000g、3～7min；

所述步骤a3）中，所述“使其分层”是通过离心实现的，所述离心的参数为：800～1200g、3～7min；

所述磷脂为b1）、b2）或b3）：

b1）1，2-二-（9Z-十八碳烯酰基）-sn-甘油-3磷酸胆碱；

b2）1，2-二-（9Z-十八碳烯酰基）-sn-甘油-3磷酸胆碱和1，2-二-（9Z-十八碳烯酰基）-sn-甘油-3磷酸乙醇胺；

b3）1，2-二-（9Z-十八碳烯酰基）-sn-甘油-3磷酸胆碱和1，2-二-十八碳烷酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱；

所述b2）中，1，2-二-（9Z-十八碳烯酰基）-sn-甘油-3磷酸胆碱和1，2-二-（9Z-十八碳烯酰基）-sn-甘油-3磷酸乙醇胺的质量比为1:0.01～2；

所述b3）中，1，2-二-（9Z-十八碳烯酰基）-sn-甘油-3磷酸胆碱和1，2-二-十八碳烷酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱的质量比为1:0.01～2；

所述中性脂质为c1）或c2）：

c1）甘油三酯；

c2）胆固醇油酸酯和甘油三酯；

所述c2）中，胆固醇油酸酯和甘油三酯的质量比为1～5：1；

所述磷脂和所述中性脂质的质量比0.25～3:5。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述缓冲液为缓冲液B；

所述缓冲液B的溶质及其在缓冲液中浓度为：15mM～25mM HEPES，80mM～120mM KCl，1.5～2.5mM的MgCl2；溶剂为去离子水；pH为7.2～7.6。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：

所述缓冲液B的溶质及其在缓冲液中浓度为：20mM HEPES，100mM KCl，2mM的MgCl2；溶剂为去离子水；pH为7.4。

4.如权利要求1至3任一所述的方法，其特征在于：

所述步骤a1）中，所述涡旋的参数为：总时长为3～5min；

所述步骤a1）中，所述离心的参数为：18000～22000g、3～7min。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：

所述涡旋的参数为：总时长4min；

所述离心的参数为：20000g、5min。

6.如权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：

所述步骤a2）中，所述“上层液相进行两次以上的纯化”中的次数以上层液相与所述缓冲液混匀，分层后无沉淀为准。

7.如权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述步骤a2）中，所述离心的参数为：20000g、5min。

8.如权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述步骤a3）中，所述离心的参数为：1000g、5min。