[发明专利]用于工业化生产手性非天然氨基酸的双酶制备法

权利要求书

1.一种用于工业化生产手性氨基酸的双酶制备法，其特征在于，所述的双酶制备法包括：

(1)制备两种基因工程菌菌体，其中所述的两种基因工程菌菌体为酰化消旋酶工程菌与L-氨基酰化酶工程菌，或者酰化消旋酶工程菌与D-氨基酰化酶工程菌；将所述的两种基因工程菌菌体与复合固定化材料混合后以滴落形式滴入固定化液中，得到固定化细胞；

(2)将所述的固定化细胞渗透交联，提高所述的固定化细胞的比活力；

(3)在生物反应器中将渗透交联的固定化细胞进行消旋和水解反应，转换乙酰化-DL-氨基酸为手性D-氨基酸或手性L-氨基酸；

所述的复合固定化材料为聚乙烯醇和明胶的复配材料，聚乙烯醇与明胶的比例为20：0.8～1.6；所述的固定化液为戊二醛与硼酸的复配材料，其中戊二醛为交联剂，浓度为5％；所述的生物反应器包括流化床生物反应器或反应釜。

2.根据权利要求1所述的用于工业化生产手性氨基酸的双酶制备法，其特征在于，硼酸水溶液为固化剂，硼酸溶液pH为8.0。

3.根据权利要求1所述的用于工业化生产手性氨基酸的双酶制备法，其特征在于，所述的明胶加热至75～85℃，后降温至55～65℃使用。

4.根据权利要求1所述的用于工业化生产手性氨基酸的双酶制备法，其特征在于，所述的步骤(1)具体为：

将所述的两种基因工程菌菌体分别克隆至同一种大肠杆菌中，分别培养后得到有效表达，离心得到湿菌体；以聚乙烯醇与明胶的复配材料作为固定化材料共同固定酰化酶菌体和消旋酶菌体；以滴落形式将所述的复合固定化材料滴入固定化液中，得到固定化细胞。

5.根据权利要求4所述的用于工业化生产手性氨基酸的双酶制备法，其特征在于，所述的有效表达为大肠杆菌感受态细胞经转化后在抗性平板上筛选得到的阳性菌株。

6.根据权利要求4所述的用于工业化生产手性氨基酸的双酶制备法，其特征在于，所述的滴落为2～3mm，用注射器抽取滴落。

7.根据权利要求1所述的用于工业化生产手性氨基酸的双酶制备法，其特征在于，所述的消旋和水解反应的底物浓度为0.1～0.3mol。

8.根据权利要求1所述的用于工业化生产手性氨基酸的双酶制备法，其特征在于，每一步骤结束后对得到的固定化菌或固定化细胞进行比活力测定。