[发明专利]空间转录组建库测序方法及所用装置

权利要求书

1.基于组织和芯片空间位置信息的空间转录组测序技术装置，其特征是：包括盖玻片 和硅基寡核苷酸芯片，在硅基寡核苷酸芯片上设有锚定探针；

所述盖玻片位于硅基寡核苷酸芯片的上方，盖玻片的面积大于硅基寡核苷酸芯片的面 积；在盖玻片和硅基寡核苷酸芯片之间用于放置厚度为10～50um的组织冷冻切片，所述组 织冷冻切片的面积小于盖玻片的面积；且组织冷冻切片的面积≤硅基寡核苷酸芯片上所有 探针覆盖的面积。

2.根据权利要求1所述的基于组织和芯片空间位置信息的空间转录组测序技术装置， 其特征是：所述硅基寡核苷酸芯片的锚定探针为5'-GGNNNNNNNCAGATCGGAAGAGCACACGTCTGA ACTCCAGTCACC。

3.根据权利要求2所述的基于组织和芯片空间位置信息的空间转录组测序技术装置， 其特征是：包括如下2段引物：

第一段引物：5'-GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT；

第二段引物：5'PHO-GNNNNNNNCCT(13-18)VN。

4.利用如权利要求1～3中任意一种装置进行的空间转录组测序技术方法，其特征是包 括以下步骤：

1)、首先加入第一段引物，第一段引物为5'-GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT， 退火温度为75度/70度；

然后再加入第二段引物，第二段引物为5'PHO-GNNNNNNNCCT(13-18)VN，退火温度从70 降到15度；

再加入T4连接酶，用于连接第一段和第二段引物，维持温度15度，反应20min，反应完成 后吸走多余液体；

2)、将组织切片放置于盖玻片表面，组织切片的厚度为10～50um，大小不超过1.5× 1.5cm；将样品朝上的盖玻片放置于显微镜下观察组织细胞的位置，并拍照用于后续定位；

完成拍照后，在芯片表面加入裂解液，从而使裂解液铺满探针芯片探针表面；将盖玻片 覆盖在芯片上，组织样品向下直接与芯片探针接触；

对芯片进行如下孵育，75℃---3min---65℃-0.1℃/s-(37～45)℃---取出；

3)、在上述步骤2)完成后，在芯片上完成第一链反转录，然后消化RNA；

4)、在上述3)步骤结束后的消化体系里，进行第二链引物的结合；

5)、将上述步骤4)孵化后的反应液里，接着进行第二链条延伸反应；

6)、将上述步骤5)反应完后，对产物进行磁珠纯化；

7)、进行PCR扩增；

8)、对PCR产物再进行磁珠纯化；

9)、将上述步骤8)完成的文库进行荧光定量并上机测序；

10)、将上述步骤9)得到的数据进行分析。