[发明专利]一种双功能酸性脲酶结构基因及其表达和应用

权利要求书

1.一种双功能脲酶结构基因，其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.含有权利要求1所述脲酶结构基因的基因工程菌。

3.含有权利要求1所述脲酶结构基因的表达载体或克隆载体。

4.权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于所述基因工程菌为重组E.coli BL21(DE3)。

5.构建权利要求4所述重组E.coli BL21(DE3)的方法，其特征在于将权利要求1所述脲酶结构基因导入E.coli BL21(DE3)中得到一种基因工程菌；步骤为：

(1)克隆权利要求1所述的双功能脲酶结构基因到表达载体pET-28a上，获得重组质粒pET-28a-ureABC；

(2)将步骤1)中所构建的重组质粒pET-28a-ureABC送去测序；

(3)将测序正确的重组质粒pET-28a-ureABC转化E.coli BL21(DE3)获得重组E.coliBL21(DE3)。

6.一种制备权利要求1所述双功能脲酶结构基因的表达产物的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将权利要求4中所述的重组E.coli BL21(DE3)活化后培养至OD₆₀₀值0.8～1.0之间，加入IPTG诱导培养；

(2)将所得发酵液高速离心，细胞沉淀用柠檬酸缓冲液重新悬浮，超声破碎后，高速离心收集上清，获得脲酶粗酶液或加工后获得酶制剂产品。

7.权利要求6所述的方法，其特征在于：所述重组E.coli BL21(DE3)的诱导温度为27℃进行诱导培养。

8.权利要求6所述的方法，其特征在于所述重组E.coli BL21(DE3)诱导培养10小时。

9.权利要求1所述双功能脲酶结构基因在黄酒酿造中的应用。

10.权利要求2所述基因工程菌在黄酒酿造中的应用。