[发明专利]一种β-羟丁酸的测定方法及其测定试剂盒

权利要求书

1.一种β-羟丁酸的测定方法，其特征在于：样本中的β-羟丁酸被β-羟丁酸脱氢酶和硫 代氧化型辅酶Ⅰ（Thio-NAD⁺）特异性氧化，生成乙酰乙酸和硫代还原型辅酶Ⅰ（Thio-NADH）； 乙酰乙酸在β-羟丁酸脱氢酶及还原型辅酶Ⅰ（NADH）存在下，又生成β-羟丁酸和氧化型辅酶Ⅰ （NAD^＋），反应循环进行，产生大量的硫代还原型辅酶Ⅰ（Thio-NADH），通过405nm波长下测定 生成的Thio-NADH的吸光度变化来定量样本中的β-羟丁酸含量，其反应方程式如下：

该方法对样本中微量的β-羟丁酸起放大作用，β-羟丁酸的计算公式如下：

。

2.一种β-羟丁酸测定试剂盒，其特征在于：该试剂盒由以下组分构成：

β-羟丁酸脱氢酶1-100KU/L

缓冲液5-500mmol/L

表面活性剂0.005-5%

稳定剂0.005-50%

硫代氧化型辅酶Ⅰ（Thio-NAD⁺）0.01-10mmol/L

还原型辅酶0.01-10mmol/L。

3.根据权利要求2所述的一种β-羟丁酸测定试剂盒，其特征在于：所述的还原型辅酶是 NADH或NADPH中的一种。

4.根据权利要求2所述的一种β-羟丁酸测定试剂盒，其特征在于：所述的缓冲液可以是 磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、Tris缓冲液、CAPS或MES缓 冲液中的一种。

5.根据权利要求2所述的一种β-羟丁酸测定试剂盒，其特征在于：所述的表面活性剂可 以是TritonX-100、Brij-35或吐温-20中的一种。

6.根据权利要求2所述的一种β-羟丁酸测定试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂是乙二 醇、小牛血清白蛋白、甘露醇或山梨醇中的一种。