[发明专利]一种提取甘露聚糖肽的方法

说明书

本发明公开了一种提取甘露聚糖肽的方法，包括：步骤A，采用α‑淀粉酶和糖化酶酶解魔芋飞粉；步骤B，将步骤A得到的酶解液用碱液提取；步骤C，将步骤B得到的飞粉蛋白液进行预超滤分离，除去小分子糖；步骤D，对步骤C得到的预超滤截留液加入蛋白酶进行一级同步酶解超滤；步骤E，对步骤D制备得到的滤出液进行二级超滤分离滤出蛋白酶；步骤F，将步骤E得到的截留液浓缩干燥，得到甘露聚糖肽提取物。本发明最终获得的魔芋飞粉甘露聚糖肽的提取率达2～3%，纯度达70～75%。本发明将酶解过程和多级超滤串联同步连续进行，可提高生产效率。本发明无需酶解反应后的灭酶过程，且蛋白酶可循环重复利用，提高了酶的利用率，节能环保。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及从天然植物魔芋中提取糖肽物的方法，特别是一种从魔芋飞粉中高效提取甘露聚糖肽的方法。

背景技术

甘露聚糖肽(Mannatide)是我国首创的一种新型免疫增强剂。在临床上，甘露聚糖肽主要作为免疫增强剂使用，用于改善免疫功能低下，增强和调节患者的免疫功能，适用于免疫功能低下的各种疾病。而且，甘露聚糖肽能减轻放疗化疗的毒副作用，可广泛用于肿瘤化疗中的辅助治疗，是一种应用前景广阔的医药原料。目前，制备甘露聚糖肽的方法主要有：发酵法、酶转化法、化学合成法等。近年来，各种植物源多肽因其易吸收、无毒副作用、安全性高等优势，逐渐成为制备生物活性肽的重要来源。

魔芋飞粉(简称飞粉)主要为魔芋的表皮部分，是加工魔芋精粉时，飘落在石臼周围的质量轻，颗粒小的细粉。目前对魔芋粉的利用主要在精粉方面，飞粉的利用率极低。飞粉中含有涩味物质，适口性很不好，还未被食品工业直接利用，极少部分飞粉作为低价饲料或干燥剂出售，大部分被弃掉，这种废弃的粉末状物质同时也对环境造成了污染。目前魔芋精粉的出粉率为52.4％～62.4％，魔芋飞粉的出粉率为36.2％～44.7％，加工魔芋粉产生的飞粉相当于精粉量的60％～80％，飞粉中含粗蛋白22.98％，粗纤维3.23％，是一种高蛋白低纤维的重要资源，也是生产活性多肽的良好原料。因此，利用我国丰富的魔芋飞粉资源，提取具有重要医用价值的甘露聚糖肽，变废为宝，具有重要的经济价值和环保意义。

目前，以魔芋飞粉为原料，主要是提取制备活性多肽，制备方法主要有发酵法和酶解法；而对魔芋飞粉中甘露聚糖肽的提取尚只有零星报道，有定性研究采用共生发酵酶解魔芋飞粉，提取获得了具有生理活性的甘露聚糖肽，但对提取魔芋飞粉甘露聚糖肽的定量研究，包括提取工艺，特别是高效提取工艺、提取率和提取物纯度等都未见诸报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种高效提取甘露聚糖肽的方法。本发明方法从魔芋飞粉中提取得到的甘露聚糖肽的提取率高达2～3％，纯度达到70-75％。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种高效提取甘露聚糖肽的方法，包括以下步骤：

步骤A：采用α-淀粉酶和糖化酶酶解魔芋飞粉原料，去除魔芋飞粉中的淀粉，得到飞粉酶解液；

步骤B：用碱液提取步骤A得到的飞粉酶解液中的蛋白，得到飞粉蛋白液；

步骤C：使用截留分子量为2,000Da的中空纤维式超滤膜对步骤B得到的飞粉蛋白液进行预超滤分离，除去小分子糖，得到预超滤截留液；

步骤D：同步酶解超滤，在步骤C得到的所述预超滤截留液中加入蛋白酶，得到截留液-蛋白酶混合液，同时将所述截留液-蛋白酶混合液通过第一超滤柱2进行一级超滤分离，得到截留液I和滤出液I；所述第一超滤柱包含截留分子量为X Da的中空纤维式超滤膜；

步骤E：酶解液二级超滤，使步骤D得到的滤出液I通过温控容器3进入第二超滤柱进行二级超滤分离，得到截留液II和滤出液II；所述第二超滤柱包含截留分子量为Y Da的中空纤维式超滤膜；