[发明专利]H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测引物组、试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于禽类病毒检测技术领域，尤其涉及一种H10N8亚型禽流感病 毒二重RT-PCR检测引物组、试剂盒，以及鉴定H10亚型禽流感病毒、N8亚 型禽流感病毒的引物对或引物对组及其试剂盒。

背景技术

禽流感病毒(AvianInfluenzaVirus，AIV)根据表面糖蛋白(Hemagglutinin， HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)抗原性差异分为不同的亚型，目 前已发现有18种HA亚型(H1-H18)和11种NA亚型(N1-N11)。AIV是一 种有包膜、单股负链、分节段的RNA病毒，病毒基因组由8个分节段负链 RNA组成。AIV基因组的分节段特性使得两种或两种以上不同亚型流感病毒 共同感染一个细胞时，子代病毒在装配时其核酸片段可能以同源交换的形式 发生基因重排而导致抗原转变，从而产生能引起大流行的新流行株。

2013年12月6日，江西省南昌市一名73岁女子罹患H10N8亚型禽流感， 因呼吸衰竭、休克死亡，这是全球首例人类感染H10N8的死亡案例。2014年 1月25日，也是在南昌，又确诊一例H10N8亚型禽流感。

目前，急需建立一种快速检测H10N8禽流感病毒的方法及开发相应试剂。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种H10N8亚型禽流感病毒二重 RT-PCR检测引物组、试剂盒及其应用。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种用于鉴定H10N8亚型禽流感病毒的引物组，包括2对特异性引物， 分别是引物对H10-1和H10-2、引物对N8-1和N8-2，其分别具有如SEQID No.1至SEQIDNo.4所示的序列。

一种用于鉴定H10亚型禽流感病毒的引物对，包括特异性引物H10-1和 H10-2，它们分别具有序列表SEQIDNo.1至SEQIDNo.2的碱基序列。

一种用于鉴定N8亚型禽流感病毒的引物对，包括特异性引物N8-1和 N8-2，它们分别具有序列表SEQIDNo.3至SEQIDNo.4的碱基序列。

一种H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测试剂盒，包括反转录试剂、 PCR试剂、DEPC水和无RNA酶的超纯水，所述的PCR试剂中含有2对特 异性引物，其分别具有如SEQIDNo.1至SEQIDNo.4所示的序列。

作为优选，所述的特异性引物H10-1和H10-2，N8-1和N8-2在所述的 PCR试剂中的终浓度为0.1-0.8μM。

作为优选，所述的反转录试剂每管16μL，其中5×ReverseTranscriptase Buffer10μL、50pmol9merRandomPrimer2μL、10mMdNTPMixture2μL、 40URibonucleaseInhibitor1μL、5U/μLAMVReverseTranscriptase1μL。

作为优选，所述的PCR试剂的体积为26.2μL/管，其中包含2×EasyTaqTM PCRSuperMix25μL，50μMH10-1和H10-2引物各0.2μL、50μMN8-1和 N8-2引物各0.4μL。

本发明还提供了所述的用于鉴定H10N8亚型禽流感病毒的引物组、所述 的引物对或所述的H10N8亚型禽流感病毒二重RT-PCR检测试剂盒在鉴别 H10N8亚型禽流感病毒、H10亚型禽流感病毒和N8亚型禽流感病毒中的应用。

本发明具有如下有益效果：