[发明专利]一种定性检测丙型肝炎抗体的试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种定性检测丙型肝炎抗体的试剂盒，其特征在于，包括定标液、阴性对照品、阳性 对照品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物；

其中所述定标液、阴性对照品、阳性对照品采用含蛋白的缓冲液溶解人血清纯化的丙 型肝炎抗体，并用含新生牛血清的缓冲液按一定比例稀释得到；

所述抗试剂是将异硫氰酸荧光素标记的重组的丙型肝炎抗原和碱性磷酸酶标记的重 组的丙型肝炎抗原，按比例加入到Tris盐缓冲液中制得；

所述磁微粒试剂是将抗异硫氰酸荧光素抗体与磁微粒偶联制得，通过抗异硫氰酸荧光 素抗体与异硫氰酸荧光素的特异性结合使抗原抗体免疫复合物固定在磁微粒上；

所述的发光底物为ALPS。

2.如权利要求1所述的一种定性检测丙型肝炎抗体的试剂盒，其特征在于，所述的抗试 剂的制作方法为：

1)、用缓冲液配置浓度为1.0～5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液；

2)、将重组的丙型肝炎抗原和异硫氰酸荧光素溶液转移到棕色玻璃瓶中，室温下搅拌1 ～2小时；

3)、使用pH8～9的碳酸氢盐缓冲液进行平衡、洗脱纯化，得到异硫氰酸荧光素标记的 重组的丙型肝炎抗原；

4)、用缓冲液配置浓度为1.0～5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液；

5)、将碱性磷酸酶溶液和重组的丙型肝炎抗原按照摩尔比为1:2～1:10的比例转移到 棕色玻璃瓶中，室温下搅拌4-5小时；

6)、使用pH8～9的碳酸氢盐缓冲液进行平衡、洗脱纯化，碱性磷酸酶标记的重组的丙 型肝炎抗原；

7)、将步骤3)得到的异硫氰酸荧光素标记的重组的丙型肝炎抗原和步骤6)得到的碱性 磷酸酶标记的重组的丙型肝炎抗原加入到含表面活性剂的Tris盐缓冲液中制得抗试剂。

3.如权利要求1所述的一种定性检测丙型肝炎抗体的试剂盒，其特征在于，所述的磁微 粒试剂的制作方法为：

1)、取充分混匀后的羧基磁珠浓缩液加入至反应瓶中，将反应瓶置于磁场中15min，待 羧基磁珠全部沉降后吸去上清；

2)、向反应瓶中加入2～5倍于羧基磁珠体积的磷酸缓冲液，混匀20～30min；

3)再次将反应瓶置于磁场中15min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清；

4)、重复步骤2)和3)一次，然后用缓冲液将羧基磁珠定容到10～50mg/mL；

5)、向羧基磁珠溶液中加入抗异硫氰酸荧光素抗体，混匀状态、2～8℃下反应18小时； 其中羧基磁珠与抗异硫氰酸荧光素抗体的质量比为100:1；

6)、使用磷酸缓冲液清洗3遍，定容至10mg/mL；2～8℃保存待用。

4.如权利要求1所述的一种定性检测丙型肝炎抗体的试剂盒，其特征在于，所述发光底 物ALPS的制备方法为：

1)、配置发光底物缓冲液；所述发光底物缓冲液中各成分的质量分数为：三乙醇胺2％， 二乙醇胺0.75％，CTAB2％，N，N-二甲二叮呢硝酸盐0.3％，牛血清白蛋白0.15％， Bronidox0.5％，用盐酸将发光底物缓冲液的pH调为9.5；

2)、用4～10倍于ALPS体积的发光底物缓冲液充分溶解ALPS。

5.如权利要求2所述的一种定性检测丙型肝炎抗体的试剂盒，其特征在于，所述的步骤 7)中的表面活性剂为Tween20、TritonX-100、Bronidox中的一种或多种，质量浓度为 0.01％～0.5％。

6.如权利要求1所述的一种定性检测丙型肝炎抗体的试剂盒，其特征在于，所述的含新 生牛血清的缓冲液中添加有质量分数为0.01％～0.05％的防腐剂四环素、0.1％～0.5％的 硫酸新霉素、0.1％～0.5％的proclin300，添加防腐剂后的新生牛血清的缓冲液用0.22μm 的滤膜过滤。