[发明专利]一种定性检测丙型肝炎抗体的试剂盒及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及丙型肝炎抗体的检测领域，具体为一种定性检测丙型肝炎抗体的试剂 盒及其制备方法和应用，尤其是一种基于磁微粒分离化学发光法定性检测人丙型肝炎抗体 (anti-HCV)的试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

丙型肝炎病毒(HCV)是诱发丙型肝炎的罪魁祸首，其通过血液传播。HCV感染常导 致慢性肝炎和肝硬化，并可能进展为肝细胞肝癌。临床常伴有冷球蛋白血症和各种风湿性 疾病的症状表现。

丙型肝炎病毒(HCV)是黄病毒科的一种单链正股RNA病毒，有衣壳。病毒基因组长 约9.5kb，编码包括结构区和非结构区在内的3000个氨基酸多肽。如同其他RNA病毒，HCV在 复制过程中发生变异而形成多种变异株。全世界至少报道了11个不同的基因型和多种亚型 以及病毒变异体。不同基因型的病毒可能影响疾病的严重程度和治疗效果。丙型肝炎病毒 主要通过被污染的血液和血制品传播，通过人体液传播的概率较小。

HCV抗体(Anti-HCV)检测可单独使用，也可以同其他检测(如HCV-RNA)联合使用， 检测个体是否感染丙型肝炎病毒和筛选被HCV污染的血液和血制品。

在国内，丙型肝炎抗体检测临床上主要以间接捕获法检测丙型肝炎抗体应用为 主，且大部分是板式酶联免疫法，灵敏度低，特异性价差，给患者带来很大的精神及经济负 担。具有自主知识产权的直接标记双抗原夹心磁微粒酶促化学发光方法的试剂盒目前应用 还较少，商品化的试剂盒主要停留在间接捕获法检测丙型抗体或者板式的水平上。间接捕 获法由于人血清中含有大量的人IgG干扰，很容易出现假阳性，灵敏度较低、特异性较差；板 式检测方式，操作复杂，灵敏度低，同时也不利于高通量的全自动检测。

因此，有待开发直接标记的双抗原丙型肝炎抗体(anti-HCV)检测灵敏度高与特异 性强，并能降低检测成本的检测技术。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的丙型肝炎抗体检测的灵敏度低，特异性价 差、成本昂贵的缺陷，提供一种灵敏度高、特异性强、成本低的直接标记双抗原丙型肝炎抗 体(anti-HCV)检测法。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

一种定性检测丙型肝炎抗体的试剂盒，包括定标液、阴性对照品、阳性对照品、抗 试剂、磁微粒试剂和发光底物；

其中所述定标液、阴性对照品、阳性对照品采用含蛋白的缓冲液溶解人血清纯化 的丙型肝炎抗体，并用含新生牛血清的缓冲液按一定比例稀释得到；

所述抗试剂是将异硫氰酸荧光素标记的重组的丙型肝炎抗原和碱性磷酸酶标记 的重组的丙型肝炎抗原，按比例加入到Tris盐缓冲液中制得；

所述磁微粒试剂是将抗异硫氰酸荧光素抗体与磁微粒偶联制得，通过抗异硫氰酸 荧光素抗体与异硫氰酸荧光素的特异性结合使抗原抗体免疫复合物固定在磁微粒上；

所述的发光底物为ALPS。

进一步的，所述的抗试剂的制作方法为：

1)、用缓冲液配置浓度为1.0～5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液；

2)、将重组的丙型肝炎抗原和异硫氰酸荧光素溶液转移到棕色玻璃瓶中，室温下 搅拌1～2小时；

3)、使用pH8～9的碳酸氢盐缓冲液进行平衡、洗脱纯化，得到异硫氰酸荧光素标 记的重组的丙型肝炎抗原；

4)、用缓冲液配置浓度为1.0～5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液；

5)、将碱性磷酸酶溶液和重组的丙型肝炎抗原按照摩尔比为1:2～1:10的比例转 移到棕色玻璃瓶中，室温下搅拌4-5小时；

6)、使用pH8～9的碳酸氢盐缓冲液进行平衡、洗脱纯化，碱性磷酸酶标记的重组 的丙型肝炎抗原；