[发明专利]抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26、乳腺特异性表达载体、转基因FVB小鼠及其制备方法

说明书

本发明公开了一种抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26，主要由重链基因H和轻链基因L组成，将其重链基因H和轻链基因L分别连接到乳腺特异性表达质粒pBC1上，从而构建得到p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26乳腺特异性表达载体pBC1‑H和pBC1‑L。将pBC1‑H和pBC1‑L线性化后，导入FVB小鼠受精卵生产出转基因FVB小鼠，以其作为乳腺生物反应器，通过乳腺特异性表达而获得抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26。该抗体降低了鼠源单克隆抗体的免疫源性，通过所得转基因FVB小鼠生产药用重组蛋白具有产量高、成本低、活性高、易规模化、能缩短新药上市周期和市场潜力巨大等优点。

技术领域

本发明技术属于生物工程领域，尤其涉及一种抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26、乳腺特异性表达载体、转基因FVB小鼠及其制备方法。

背景技术

Shih等(1981年)科学家首次从大鼠胚胎神经母细胞中发现一种新的原癌基因，并命名neu基因。随后通过核酸序列分析比对和染色体谱分析发现neu原癌基因与原癌基因erb B存在高度同源性。因此，neu原癌基因被认为是erb B原癌基因的一种相关基因，并被命名为erb B2/HER2。Coussens等发现人的原癌基因erb B2位于人17号染色体长臂的2 区1带(17q21)，其编码产物是分子量为185kDa的受体酪氨酸激酶(RTK，receptor tyrosinekinase)，因而又被称为p185蛋白。它是由1255个氨基酸残基组成的一种跨膜糖蛋白。RTK是一个超家族(superfamily)，其成员包括erb B原癌基因编码产物表皮生长因子受体(EGFR，epidermal growth factor receptor)，以及erb B2/HER2受体、erb B3/HER3受体和erbB4/HER4受体等。erb B受体非常广泛地分布于除血管组织之外的所有上皮细胞的细胞膜上；erb B2受体常见于正常人各种体腔上皮、腺上皮及胚胎中，erb B2 受体均在他们中存在微弱表达；erb B3受体除在人造血系统未表达之外，其在人体多数部位均存在表达；erbB4受体在除在肾小球及周围神经未表达外，其在其他组织均中均存在表达。膜外区、膜内区和跨膜区(TM，transmembrane)组成了erb B2受体的主要结构。膜外区具有特异性，它与配体相结合，接受信号，含有大量半胱氨酸残基重复序列；膜内区决定生长因子的胞内生物效应。跨膜区主要功能是锚定受体和导致受体的变构效应，一般由22-26个氨基酸残基构成一个α螺旋状结构，高度疏水；erb B2受体的功能区位于 C末端，主要包括ATP的结合位点和酪氨酸激酶功能区。erb B家族成员的突变在人类肿瘤中比较常见，尤其是erb B2，它们的主要功能是刺激细胞生长。

erbB2受体的激活与肿瘤发生相关，除了胚胎发育等特定的发育阶段，erb B2在正常组织中的表达量是很低的；而与之相反，在乳腺癌、卵巢癌和肺癌等多种恶性肿瘤细胞中都发现了erb B2基因的放大与p185^erbB2蛋白的过表达。由于erb B2基因的放大与p185^erbB2蛋白的过表达，从而导致erb B2受体激活，并增强其介导的信号传导，最终导致正常的细胞发生恶性转化以及形成恶性肿瘤。