[发明专利]一种鸡马立克氏病耐热保护剂活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种鸡马立克氏病耐热保护剂活疫苗，其特征在于，由鸡马立克氏病病毒与耐热保护剂混合冻干而成；所述耐热保护剂由以下质量体积百分含量计的组分构成：蔗糖8～10％，聚乙烯吡咯烷酮2～4％，聚赖氨酸3～6％，酶解明胶1～2％，乳蛋白水解物2～6％，谷氨酰胺0.4～1％，L－精氨酸0.05～0.5％，甘油1～4％，芦布若尔2～5％，余量为水。

2.一种权利要求1所述的鸡马立克氏病耐热保护剂活疫苗的制备方法，其特征在于，制备按如下步骤进行：

a.细胞制备：用EDTA-胰酶消化SPF鸡胚成纤维细胞，并加入细胞生长液，在36～37℃温度下培养20～28小时，至生成细胞单层；所述EDTA-胰酶的浓度为质量体积百分含量为1％～3％；

b.接毒：种入鸡马立克氏病病毒，加入细胞培养液体积10％的辅助培养液，按100～200万个/毫升复种鸡胚成纤维细胞，36～37℃继续培养2～4日；

c.收获与冻干：细胞病变达75％～85％时，弃去90％细胞培养液，转动细胞培养瓶，使细胞全部脱离瓶壁，收集、低速离心，取沉淀细胞并称重，加入耐热保护剂，进行匀浆和超声波裂解，定量分装和冷冻真空干燥，制成鸡马立克氏病耐热保护剂活疫苗；

步骤b中辅助培养液为含有水解乳蛋白、精氨酸和谷氨酰胺的水溶液。

3.根据权利要求2所述的鸡马立克氏病耐热保护剂活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤a中EDTA-胰酶的消化温度为2～8℃，消化时间为10～18小时。

4.根据权利要求2所述的鸡马立克氏病耐热保护剂活疫苗的制备方法，其特征在于，步骤c中耐热保护剂的加入量为每克沉淀细胞加入100～300ml。