[发明专利]一种曲妥珠单抗键联金纳米棒复合物、其制备方法以及在HER2阳性乳腺癌诊治中的应用

权利要求书

1.一种曲妥珠单抗键联金纳米棒复合物，其特征在于是通过Au-S键的作用，将金纳米棒和半胱氨酸-卟啉类荧光分子复合物键连，然后通过戊二醛化学交联的方法，将金纳米棒-半胱氨酸-卟啉类荧光分子复合物和药物曲妥珠单抗键连得到，其由以下依次相连的各部分组成：金纳米棒、半胱氨酸、卟啉类荧光分子以及曲妥珠单抗。

2.如权利要求1所述的曲妥珠单抗键联金纳米棒复合物，其特征在于所述的卟啉类荧光分子为对氯乙氧基苯基卟啉。

3.一种制备权利要求2所述的曲妥珠单抗键联金纳米棒复合物的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)金纳米棒的制备

a.金种子液的制备：向烧杯中加入7.5ml 0.1M的CTAB溶液，在轻微搅拌的条件下加入250μl 0.01M的氯金酸溶液，然后加入新鲜配制的0℃的0.01M的硼氢化钠溶液60μl，在22-28℃的温度下轻微搅拌1-5min，待用；

b.生长液的制备：向另一个烧杯里依次加入以下溶液：0.1M的CTAB溶液10ml，0.01M的氯金酸溶液425μl，0.01M的硝酸银溶液60μl-100μl，0.1M的抗坏血酸溶液67μl，混合均匀后得到生长液；

c.金纳米棒的制备：将金种子液105μl加入到生长液中，整个过程均在轻微搅拌以及温度为22-28℃的条件下进行，加完药品后持续搅拌，待溶液变色后，将烧杯移入温度为27-28摄氏度的恒温水浴中，静止过夜处理；反应完后得到金纳米棒溶液，将金纳米棒溶液移入离心管中，离心前将溶液进行加热处理，待溶液中的CTAB全部溶解后，将药品配平后放入离心机，离心，离心完后用吸管将上清液吸出，沉淀用去离子水重新溶解，重复以上离心过程2次，将收集的金纳米棒重悬于适量体积的去离子水中，将收集的金纳米棒溶液放在4℃的冰箱里保存，用于之后的表征和再反应；

2)卟啉金纳米棒键连

d.卟啉-半胱氨酸溶液的制备：烧瓶中加入25ml的DMF溶液，50mg的对氯乙氧基苯基卟啉，0.75g-1.25g半胱氨酸，搅拌混合均匀后，加入2～3滴三乙胺，加热反应24h，加入饱和食盐水和二氯甲烷进行产物分离，将溶解有目标物质的二氯甲烷相通过柱层析进行提纯，得到卟啉-半胱氨酸溶液；

e.金纳米棒-半胱氨酸-卟啉的制备：在烧杯中依次加入甲醇，上述步骤c得到的金纳米棒溶液和步骤d得到的卟啉-半胱氨酸溶液，常温搅拌18-24h，反应结束后离心，倒掉上面溶液，加入甲醇再次离心，倒掉上面溶液，然后加入DMF分散沉淀，超声处理使沉淀更好地分散在溶液中，得到金纳米棒-半胱氨酸-卟啉复合物；

3)曲妥珠单抗键联金纳米棒复合物的制备

先将金纳米棒-半胱氨酸-卟啉复合物分散在0.005M的CTAB溶液中，使得金纳米棒-半胱氨酸-卟啉复合物的浓度为100nM，然后用戊二醛交联法，将10ml的金纳米棒-半胱氨酸-卟啉复合物溶液分散在浓度为0.01M的PBS溶液中，常温放置0.5-2h，离心处理，沉淀重新分散在配制好的0.01M的PBS溶液中，然后加入过量的曲妥珠单抗，4℃下孵育12h，离心除去多余的曲妥珠单抗，得到金纳米棒-半胱氨酸-卟啉-曲妥珠单抗复合物，将得到的复合物分散在0.01M的PBS溶液中，温度4℃保存，即得。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于步骤3)中所述的0.01M的PBS溶液为含有1.38MNaCl，0.0027M KCl,0.05％(v/v)吐温-20以及5％(v/v)戊二醛的0.01M的PBS溶液，pH 7.4。

5.权利要求1或2所述的曲妥珠单抗键联金纳米棒复合物在制备HER2阳性乳腺癌诊治试剂中的应用。