[发明专利]一种曲妥珠单抗键联金纳米棒复合物、其制备方法以及在HER2阳性乳腺癌诊治中的应用

说明书

本发明公开了一种曲妥珠单抗键联金纳米棒复合物、其制备方法以及在HER2阳性乳腺癌诊治中的应用。本发明解决了靶向性金纳米粒子光热转化效率可调节性差及不能定位的缺点。所述方法包括：首先，制备出具有一定长径比的金纳米棒，纵向吸收峰为650‑850nm，可满足穿透人体组织的最佳光波长；然后，将半胱氨酸与卟啉类荧光分子连接，接着通过Au‑S键的作用，将金纳米棒和半胱氨酸‑卟啉复合物键连，最后通过戊二醛化学交联的方法，将金纳米棒‑半胱氨酸‑卟啉复合物和药物曲妥珠单抗键连，得到的曲妥珠单抗键联金纳米棒复合物可通过荧光显示肿瘤原位或微转移病灶，利用金纳米棒特有的光热特征，对检测到的肿瘤病灶进行靶向性光热治疗，可有效解决肿瘤耐药的难题。

技术领域

本发明涉及一种曲妥珠单抗键联金纳米棒复合物，还涉及该纳米棒复合物的制备方法及其在HER-2阳性乳腺癌诊治中应用，本发明属于生物医药技术领域。

背景技术

随着新药和新方法的临床开发和应用，早期乳腺癌的治疗效果有了很大的提高，但是三期和四期乳腺癌的5年生存率仍然只有57％和20％，其中表皮生长因子2受体(HER2)阳性表达的乳腺癌患者复发转移风险很高，预后尤其差。2006年瑞士罗氏公司研发出了针对乳腺癌细胞HER2靶点的第一个分子靶向药物——曲妥珠单抗，它可与HER2结合，阻断HER2相关的肿瘤生长信号通路，抑制HER2过度表达的肿瘤细胞的增殖。目前曲妥珠单抗已被FDA批准用于各期HER2阳性乳腺癌的治疗，但一些患者在开始曲妥珠单抗治疗时出现原发性耐药，还有许多患者在接受曲妥珠单抗治疗后一年内相继出现耐药。如何克服这个治疗瓶颈是乳腺癌治疗面临的一大难题。

曲妥珠单抗耐药与许多机制相关，包括糖蛋白MUC4过表达、胰岛素样生长因子过表达和固有的P13K/Akt活性等，至于HER2受体胞外区突变的情况非常少见，在大多数情况下HER2受体本身并无变化，同时控制这些与耐药相关的多个因素非常困难，于是我们想到了以曲妥珠单抗为载体精确靶向到病灶部位进行热疗，通过光热治疗杀死残余耐药肿瘤细胞。

在众多可应用于生物医学方面的纳米材料中，金纳米家族具有良好的生物相容性和易被修饰特性，因此在肿瘤的诊断与治疗中有较好的应用前景，并取得了一些具有实际应用价值的研究成果。例如，EGFR抗体修饰的金纳米粒子用于肿瘤的早期诊断，可以明显的区分肿瘤细胞与正常细胞。Yang J等人将EGFR特异性抗体－西妥昔单抗Cetuximab连接在金纳米粒子上，利用金纳米粒子的光学特性通过光学图像得以使肝癌细胞区别于正常细胞。Mukherjee P等人研究发现，金纳米粒子可以特异性地结合VEGF-165和bFGF，发挥抑制肿瘤血管生成的作用；Agasti SS等人通过O-硝基苄基(O-nitrobenzyl，ONB)将5-FU连接于金纳米粒子的表面，研制了一种“光反应”性的金纳米粒子-抗肿瘤药物控释系统。

在这些国内外前期研究的基础上，本发明结合曲妥珠单抗的特异靶向性和金纳米粒子在肿瘤治疗中的应用特征，将通过化学合成制备由曲妥珠单抗键连的金纳米粒子。但肿瘤热疗是一个复杂的过程，由于不同波长的光对组织的穿透能力不同，对组织穿透能力增强的光其热效率就降低，而穿透力不足就无法到达准确病灶部位。由于常用的金纳米壳的径向调节范围单一(仅有球半径可调)，无法满足治疗不同大小肿瘤和体内不同深度肿瘤的需求，我们将金纳米棒键连曲妥珠单抗，同时在结合曲妥珠单抗前通过半胱氨酸-卟啉键连金纳米棒，利用卟啉近红外荧光显像识别肿瘤病灶部位，到达影像定位和靶向性热疗的效果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种能够用于HER2阳性乳腺癌诊治的曲妥珠单抗键联金纳米棒复合物以及制备方法和用途。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

(1)制备出长径比不同的金纳米棒，纵向吸收峰为650-850nm，可满足穿透人体组织的最佳光波长，并在少量的CTAB包裹下稳定存在；

(2)制备出键联不同数量的半胱氨酸的卟啉类荧光分子，从而可能有效控制金纳米棒上键联曲妥珠单抗的量；