[发明专利]一种阿法替尼及其有关物质的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及阿法替尼及其有关物质的检测方法，尤其是阿法替尼顺式异构体的检测方法属于制药技术领域。

背景技术

阿法替尼(Afatinib)是一种表皮生长因子受体(EGFR)和人表皮生长因子受体2(Her-2)酪氨酸激酶的不可逆抑制剂，其二马来酸盐可用于治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)等疾病。该化合物的化学名为(2E)-4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-6-{[4-(N,N-二甲基氨基)-1-氧代-2-丁烯-1-基]氨基}-7-((3S)-四氢呋喃-3-基氧基)-喹唑啉，结构式如下：

WO2007/085638A公开了一种阿法替尼的制备方法，其合成路线如下：

所得阿法替尼粗品可以进一步精制后，与马来酸反应，生成阿法替尼二马来酸盐。

阿法替尼(API)含有双键和手性碳结构且稳定性较差，因此阿法替尼及其二马来酸盐在制备或储存过程中易产生杂质，包括(S,Z)-N-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[(四氢呋喃-3-基)氧基]喹唑啉-6-基}-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(RC1)、(R,E)-N-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[(四氢呋喃-3-基)氧基]喹唑啉-6-基}-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺(RC2)、(S,Z)-N-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[(四氢呋喃-3-基)氧基]喹唑啉-6-基}-4-(羟基)丁-2-烯酰胺(RC3)、(S)-N4-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(四氢呋喃-3-基)氧基]喹唑啉-4,6-二胺(RC4)、二甲胺(RC5)等，其中，顺式异构体杂质RC1和与目标产物性质相近而难以分离、检测。WO2007/085638A的合成方法中还涉及工艺杂质(S)-N-{4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[(四氢呋喃-3-基)氧基]喹唑啉-6-基}-4-氨甲酰基-膦酸二乙基酯(RC6)。

WO2013/052157A公开了一种阿法替尼二马来酸盐的纯度测定方法，其采用超高液相色谱法实现，色谱柱为PhenomenexC18100A(150mm×4.6mm，2.6μm)，检测波长为260/4nm，Ref550/100nm，柱温为40℃，流速为0.7mL/min，进样量为1μL，流动相为乙腈为流动相A，0.2％甲酸+0.1％七氟丁酸pH2为流动相B，其梯度洗脱条件如下：

该方法所用仪器设备昂贵且不具有普遍适应性，并且对所用试剂、色谱柱要求苛刻，其中七氟丁酸价格昂贵。此外，该方法检测阿法替尼时可检出的杂质种类少，且分离度差。由此可见，该方法的实用性和适用性差。

因此，需要一种适于分离和检测阿法替尼及其有关物质，尤其是其顺式异构体的方法，以有效控制药品的质量。

发明内容

本发明提供了一种阿法替尼及其有关物质的检测方法，是在高效液相色谱仪上进行梯度洗脱，色谱柱为十八烷基键合硅胶色谱柱，流动相为含0.2％甲酸、0.1％三氟乙酸的水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，检测波长为255nm～265nm，柱温为35～45℃，其中，梯度洗脱条件如下，

在本发明的一些优选实施方案中，所述有关物质是阿法替尼的顺式异构体。

在本发明的一些优选实施方案中，所述十八烷基键合硅胶色谱柱为PhenomenexC18(250mm×4.6mm，5μm)。

发明人发现检测波长可选择255nm～265nm范围内的任意波长，且均能满足对阿法替尼及其有关物质的检测。在本发明的一些优选实施方案中，所述检测波长为260nm。

在本发明的另一些优选实施方案中，所述柱温为40℃。

在本发明的一些优选实施方案中，所述流速为1.0mL/min。

在本发明中，所述“流速”±0.1mL/min、“流动相比例”±2％、“检测波长”±2nm对本发明的实施无影响，且均落入本发明的保护范围内。

发明人还发现，本发明的稀释剂可以选择任意可溶解样品且对系统无干扰的溶剂，例如水，30％乙腈，乙腈，甲醇，或体积比为85:15的含0.2％甲酸、0.1％三氟乙酸的水溶液：乙腈的混合溶液，且均能满足对阿法替尼及其有关物质的检测。