[发明专利]一种同时检测ALDH2基因*2和ADH1B基因*2多态性的引物与方法在审
| 申请号： | 201511006897.X | 申请日： | 2015-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN105524987A | 公开（公告）日： | 2016-04-27 |
| 发明（设计）人： | 赵薇薇;胡昌明;梁耀铭;于世辉;燕启江;郭周萍 | 申请（专利权）人： | 广州金域检测科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京精金石专利代理事务所(普通合伙) 11470 | 代理人： | 刘晔 |
| 地址： | 510000 广东省广州市国际生物岛*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 同时 检测 aldh2 基因 adh1b 多态性 引物 方法 | ||
1.一种同时检测ALDH2基因*2和ADH1B基因*2多态性的引物，其特征在于：包括PCR扩增 引物和SNaPshotPCR引物；所述PCR扩增引物包括：针对ALDH2基因*2的上游引物5’- TGGTGGCTACAAGATGTCG-3’和下游引物5’-GCAGGTCCCACACTCACA-3’以及针对ADH1B基因*2的 上游引物5’-CAACACTCTCCACGATGC-3’和下游引物5’-TGAACAGCTTCTCTTTATTCT-3’；所述 SNaPshotPCR引物包括：针对ALDH2基因*2的SNaPshotPCR引物5’- ACGGGCTGCAGGCATACACT-3’以及针对ADH1B基因*2的SNaPshotPCR引物5’- TTTTAGATGGTGGCTGTAGGAATCTGTC-3’。
2.根据权利要求1所述的同时检测ALDH2基因*2和ADH1B基因*2多态性的引物，其特征 在于：所述PCR扩增引物中，ALDH2基因*2和ADH1B基因*2的引物浓度比为1：1；所述SNaPshot PCR引物中，ALDH2基因*2和ADH1B基因*2的引物浓度比为1：1。
3.一种同时检测ALDH2基因*2和ADH1B基因*2多态性的方法，其特征在于：包括如下步 骤：
S1、提取DNA样品；
S2、以步骤S1所述的DNA样本为模板，利用权利要求1或2中所述的PCR扩增引物进行多 重PCR扩增，并对扩增产物进行纯化；
S3、以步骤S2所述的纯化后的PCR扩增产物为模板，利用权利要求1或2中所述的 SNaPshotPCR引物进行SNaPshotPCR扩增，并对SNaPshotPCR扩增产物进行纯化；
S4、采用毛细管电泳技术对步骤S3所述的纯化后的SNaPshotPCR扩增产物进行检测， 并对检测结果进行分析，确定SNP位点及其基因型。
4.根据权利要求3所述的同时检测ALDH2基因*2和ADH1B基因*2多态性的方法，其特征 在于：所述步骤S1中的DNA样品为EDTA抗凝外周血的DNA样品。
5.根据权利要求3所述的同时检测ALDH2基因*2和ADH1B基因*2多态性的方法，其特征 在于：所述步骤S2中的多重PCR扩增反应条件包括：98℃预变性3min，98℃变性10s，58℃退 火30s，72℃延伸1min，进行29个循环，最后72℃延伸5min，结束后25℃保温。
6.根据权利要求3所述的同时检测ALDH2基因*2和ADH1B基因*2多态性的方法，其特征 在于：所述步骤S3中的SNaPshotPCR扩增反应条件包括：96℃变性10s，55℃退火5s，60℃延 伸30s，进行25个循环，结束后4℃保温。
7.根据权利要求3所述的同时检测ALDH2基因*2和ADH1B基因*2多态性的方法，其特征 在于：所述步骤S4中，采用GENEMAPPERIDV4.1软件对检测结果进行分析。
8.根据权利要求1或2所述的同时检测ALDH2基因*2和ADH1B基因*2多态性的引物在制 备检测ALDH2基因*2和ADH1B基因*2多态性试剂中的用途。
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