[发明专利]一种兰科植物种子表面消毒方法

权利要求书

1.一种兰科植物种子表面消毒方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：破壳取种，剖切开兰科植物果荚，采用至少1层定性滤纸和至少2层医用纱布包扎兰科植物种子；然后将种子放入离心管中，以350-550转每分钟的速度离心处理至少1分钟将其收集；

S2：酒精浸泡，将包好的种子放入70-85%酒精溶液中摇晃或涡旋处理2-3分钟，然后以350-550转每分钟的速度离心处理至少1分钟，倒去酒精；

S3：第一次无菌水清洗，步骤S2处理后的种子，将其放入装有3倍以上体积无菌水的离心管中离心清洗一次；

S4：氯化汞溶液消毒处理，将清洗后的种子浸入0.05-0.3%氯化汞溶液中消毒处理3-5分钟或涡旋处理2-3分钟，然后以350-550转每分钟的速度离心处理至少1分钟，倒去氯化汞溶液；

S5：第二次无菌水处理，步骤S4处理后，倒入3倍以上体积的无菌水，再以350-550转每分钟的速度离心处理至少1分钟；然后采用吸水纸吸除上部水分，进行灭菌干燥，重复干燥至少2次；

S6：后续处理，最后用灭菌干燥的吸水纸吸去残留液体，得到无菌种子。

2.根据权利要求1所述的一种兰科植物种子表面消毒方法，其特征在于：所述步骤S1破壳取种时，将滤纸垫在底部，果荚剖开后，种子直接掉入滤纸上方；并且所述种子为细粉末状。

3.根据权利要求1或2所述的一种兰科植物种子表面消毒方法，其特征在于：所述步骤S1中的果荚为成熟的兰科植物蒴果。

4.根据权利要求1所述的一种兰科植物种子表面消毒方法，其特征在于：所述步骤S2、步骤S4和步骤S5中的离心处理为500转每分钟的速度离心处理2分钟。

5.根据权利要求1或4所述的一种兰科植物种子表面消毒方法，其特征在于：步骤S2中的酒精溶液浓度为50%~85%，优选70~80%。

6.根据权利要求1所述的一种兰科植物种子表面消毒方法，其特征在于：所述步骤S3和步骤S5中的无菌水为高温高压湿热灭菌后的纯净水或生理盐水。

7.根据权利要求1或6所述的一种兰科植物种子表面消毒方法，其特征在于：所述步骤S3和步骤S5中的无菌水，经过温度为121～125℃和压力为0.1～0.15Mpa的湿热环境中，灭菌消毒时间10～15min获得。

8.根据权利要求7所述的一种兰科植物种子表面消毒方法，其特征在于：所述步骤S2中将清洗后的种子浸入0.1%氯化汞溶液中消毒处理3-5分钟。

9.根据权利要求1所述的一种兰科植物种子表面消毒方法，其特征在于：步骤S6中得到的无菌种子，放入到置有培养基的培养瓶中，然后用移液枪向培养瓶中注入无菌水，在温度为21-27℃，黑暗条件下培养8-12天；再移入到温度为25℃，光强为1500~2500lx，光照时间为10h/d的条件下培养。

10.根据权利要求9所述的一种兰科植物种子表面消毒方法，其特征在于：所述培养基的配方如下：1/2MS+NAA0.5mg/L+20g/L土豆泥+30g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH5.8；其中，土豆泥的制备方法如下：将土豆洗净后削皮，用刀切成小块，然后放入榨汁机中加水榨碎，得到的匀浆即为土豆泥。