[发明专利]一种双歧杆菌乳酸菌混合发酵菌酶解法制备工艺及其运用

权利要求书

1.一种双歧杆菌乳酸菌混合发酵菌酶解法制备工艺，其特征在于，所述的步骤包括：制 备扩大菌种液和一级种子培养液得到一级菌种液，再将一级菌种液与种子培养基在种子罐 混合培养得到种子罐菌种，再将所述的种子罐菌种与发酵罐培养基混合培养并通过诱导液 进行发酵得到发酵液，当发酵完毕后，进行发酵液离心，得到湿菌泥，其中湿菌泥即为双歧 杆菌乳酸菌的混合发酵菌泥；其中所述的扩大菌种液制备包括酶解法制备试管培养基和接 种两部分；其中所述的一级种子培养液制备包括酶解法制备一级种子培养液；所述的种子 培养基的制备包括酶解法制备种子培养基；所述的发酵罐培养基的制备包括酶解法制备发 酵罐培养基。

2.根据权利要求1所述的一种双歧杆菌乳酸菌混合发酵菌酶解法制备工艺，其特征在 于，所述的扩大菌种液的制备包括以下步骤：

酶解法制备试管培养基：将10g核桃仁、10g花生仁、5克酪蛋白酸钠、0.1克无水氯化钙 不分前后顺序投入到300ml水中进行研磨并打成浆状过滤得到浆液，再在浆液中加入700ml 水并进行加热至53℃~57℃并进行搅拌，在搅拌中加入脂肪酶进行酶解，酶解后再加入无花 果酶进行酶解得到酶解液，然后向酶解液中加入3gL-精氨酸、3g番茄粉、6g牛肉膏、2g酵母 浸粉、5g蛋白胨、0.1g柠檬酸铵、0.6g丝氨酸、3g氯化钠、5g乳糖、8g葡萄糖、8g乙酸钠、3.2g 磷酸氢二钾进行搅拌溶解后分装于试管中，每支试管中分装20ml，将所述多个试管放入医 用消毒器中，采用0.1~0.14Mpa灭菌20分钟后得到试管培养基；

接种：在无菌条件下，打开冻干管菌种，其中冻干管菌种包括：双歧杆菌（菌号： CGTMCC—1.2212，中国普通微生物菌种保藏管理中心），

短双歧杆菌（菌号：CGTMCC—1.2213，中国普通微生物菌种保藏管理中心），婴儿双岐杆 菌（菌号：CGTMCC—1.2202，中国普通微生物菌种保藏管理中心），鼠李糖乳杆菌（菌号： CICC—6065，中国工业微生物菌种保藏管理中心），将所述的4株菌种内分别加入以上灭菌 的试管培养基1ml，摇动溶化后得到冻干管菌悬液备用，再将所述的4支冻干管菌悬液分别 各取1ml加入至4支试管培养基中进行密封后放摇瓶机摇动制得扩大菌种液。

3.根据权利要求1所述的一种双歧杆菌乳酸菌混合发酵菌酶解法制备工艺，其特征在 于，所述的一级种子培养基培养中各组分为：

核桃仁20克、花生仁20克、酪蛋白酸钠10克、L—精氨酸5克、番茄粉6克、牛肉膏8克、酵 母浸粉3克、蛋白胨3克、柠檬酸胺0.15克、丝氨酸0.8克、葡萄糖酸0.4克、氯化钠3克、乳糖10 克、葡萄糖15克、乙酸钠6克、无水氯化钙0.1克、磷酸氢二钾2克、50万单位脂肪酶10克、10万 单位无花果酶10克、自来水1000毫升，PH自然；

将所述一级种子培养基中的核桃仁、花生仁、酪蛋白酸奶、无水氯化钙加入所述600毫 升的水中进行研磨至浆状，过滤后得到浆液，然后再所得浆液中加入400毫升水并加热到53 ℃~57℃并进行搅拌，在搅拌下加入脂肪酶进行酶解，酶解后再加入无花果酶进行酶解得到 酶解液，然后向酶解液中加入其他原料，进行搅拌熔化得到一级种子培养液；

将所述的一级种子培养液量取所用量加入到三角瓶中封口后灭菌，将装有经过灭菌的 培养液的三角瓶放超净工作台中降温，当温度降到31℃~37℃，在无菌条件下将所述培养好 的扩大菌种液接到三角瓶中，即100ml一级种子培养液接入的扩大菌种液为4ml，完毕后放 摇瓶机中，得到一级菌种液。