[发明专利]一种检测ITPA基因多态性的引物及其方法

权利要求书

1.一种检测ITPA基因多态性的引物，其特征在于：包括PCR扩增引物和SNaPshotPCR引 物；所述PCR扩增引物为：针对ITPA的上游引物5’-GGAGATGGGCAGCAGAGTTA-3’和下游引物 5’-CAGGTCACAGGAAGACAGAGA-3’；所述SNaPshotPCR引物包括：针对ITPA0101的SNaPshot PCR引物5’-AAAAAAAAAAAAGATCGATCGAGAAATCCAACCATCTTTTAAAAA-3’，针对ITPA7354的 SNaPshotPCR引物5’-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAATATTTTCTGTGCCACCAAAGTGCAT G-3’。

2.根据权利要求1所述的检测ITPA基因多态性的引物，其特征在于：所述SNaPshotPCR 引物中ITPA0101和ITPA7354的引物浓度比为1:1。

3.一种检测ITPA基因多态性的方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1提取DNA样品；

S2以步骤S1提取的DNA样本为模板，采用权利要求1中所述的PCR扩增引物进行多重PCR 扩增，并对扩增产物进行纯化；

S3以步骤S2纯化后的PCR扩增产物为模板，采用权利要求1中所述的SNaPshotPCR引物 进行SNaPshotPCR扩增，并对SNaPshotPCR扩增产物进行纯化；

S4采用毛细管电泳技术进行检测，对检测结果进行分析，确定SNP位点及其基因型。

4.根据权利要求3所述的同时检测IL28B和ITPA基因多态性的方法，其特征在于：所述 步骤S1中的DNA样品为EDTA抗凝外周血的DNA样品。

5.根据权利要求3所述的检测ITPA基因多态性的方法，其特征在于：所述步骤S2中的多 重PCR扩增反应条件包括：阶段1：98℃3min；阶段2：98℃10s；阶段3：58℃30s；阶段4：72 ℃1min；阶段5：返回到阶段2，29个循环；阶段6：72℃5min；阶段7：25℃保温。

6.根据权利要求3所述的检测ITPA基因多态性的方法，其特征在于：所述步骤S3中的 SNaPshotPCR扩增反应条件包括：阶段1：96℃10s；阶段2：55℃5s；阶段3：60℃30s；阶段 4：返回到阶段1，25个循环；阶段5：4℃保温。

7.根据权利要求3所述的检测ITPA基因多态性的方法，其特征在于：所述步骤S4中采用 GENEMAPPERIDV4.1软件对检测结果进行分析。

8.根据权利要求1所述的检测ITPA基因多态性的引物在制备检测ITPA基因多态性试剂 中的用途。