[发明专利]一种研究微生物间相互关系的透析袋分离培养法

权利要求书

1.一种研究不同种类微生物共同培养的方法，其特征是:

（1）pH值检测

a量取去离子无菌水约50ml，加入浓盐酸，用pH调节计配制pH=4的溶液；

b取200ml去离子无菌水放入烧杯A1，同时加入5ml上述pH=4的溶液，用PH计检测烧 杯A1内pH；依次取5ml上述pH=4的溶液分别加入到5kd、10kd、25kd、1000kd透析袋内并用透 析袋夹将其两头密封，将透析袋分别置于200ml去离子无菌水的烧杯B1、C1、D1、E1内，用pH 计检测上述四只烧杯内pH值，记录B1、C1、D1、E1烧杯内PH值达到A1烧杯pH的时间，记为时间 T₁；

（2）葡萄糖检测

a用去离子无菌水配制浓度为25%的葡萄糖溶液50ml

b取200ml去离子无菌水加入烧杯A2，同时加入5ml上述浓度为25%的葡萄糖溶液，用葡 萄糖试剂盒检测并记录烧杯内葡萄糖浓度；依次取5ml上述浓度为25%的葡萄糖溶液分别加 入5kd、10kd、25kd、1000kd透析袋内，将透析袋分别放入盛有200ml去离子无菌水的烧杯B2、 C2、D2、E2内，用葡萄糖试剂盒检测烧杯B2、C2、D2、E2内葡萄糖浓度，记录B2、C2、D2、E2烧杯 内葡萄糖浓度达到A2烧杯葡萄糖浓度一致的时间，记为时间T₂；

（3）BSA牛血清蛋白检测

a用无菌PBS配制浓度为2%的牛血清蛋白溶液50ml

b取200mlPBS加入烧杯A3，同时加入5ml上述浓度为2%的牛血清蛋白溶液，检测并记 录烧杯A3内牛血清蛋白溶液浓度；取5ml上述浓度为2%的牛血清蛋白溶液分别加入5kd、 10kd、25kd、1000kd透析袋内，将透析袋分别放入盛有200ml无菌PBS的烧杯B3、C3、D3、E3内， 检测烧杯B3、C3、D3、E3内牛血清蛋白浓度，记录B3、C3、D3、E3烧杯内牛血清蛋白浓度达到A3 烧杯牛血清蛋白浓度一致的时间，记为时间T₃；

（4）通过对时间T₁、T₂、T₃的统计，确定细菌共培养最佳培养时间为T₄，最佳透析袋孔径 为1000kd；

(5)根据步骤（4）结果，将不同种类微生物转移至1000kd透析袋中，置于相同培养基中 培养24小时后，无菌取出各透析袋中含有细菌的培养基，活菌计数确定各透析袋中微生物 数量，进而确定不同微生物之间的相互促进或拮抗作用；

（6）根据步骤（1）、（2）、（3）中得到的结果，将不同种类微生物分别置于5kd、10kd、 25kd、1000kd透析袋中，相同孔径的透析袋置于相同培养基中培养24小时后，无菌取出各透 析袋中含有细菌的培养基，活菌计数确定各透析袋中微生物数量，进而确定不同孔径蛋白 对微生物之间的相互促进或拮抗作用。