[发明专利]西南远志的组织培养方法

权利要求书

1.一种西南远志的组织培养方法，其特征在于由以下步骤组成：

一、外植体的选择：选择健壮的野生西南远志，用其种子作为外植体；

二、外植体的消毒：先用自来水冲洗外植体8～12min，然后采用无汞消毒法用60～75％的乙醇溶液消毒30～60秒，用无菌水冲洗3～5遍，按重量比例1:2～2.5将高锰酸钾和甲醛溶液放入玻璃干燥器的底层，随即把外植体放入玻璃干燥器隔层瓷板上，盖好盖子熏蒸消毒1～2小时，再用浓度为3～6％的次氯酸钠消毒10～15min，消毒完成后，再用无菌水冲洗4～6遍；

三、初始诱导培养：把外植体接种于下列经改良的无菌诱导培养基中，所述的改良的无菌诱导培养基为：在每升KC培养基中加入KT 1.0～1.5mg、NAA 0.4～0.8mg、VB ₂ 5～20mg、活性炭1～1.5g、重量百分比浓度为10～15％的马铃薯汁100～150g，在温度25～28℃、光照强度1000～15001x、光照时间为10～12个小时的条件下，培养55～65天，形成原球茎；

四、原球茎增殖培养：将上述的生长良好的原球茎转接入下列增殖培养基中，所述的增殖培养基为：在每升KC培养基中加入NAA 1.5～2.0mg、KT 0.5～0.8mg、VC 10～30mg、VB ₂ 5～20mg、重量百分比浓度为10～15％的马铃薯汁100～150g、蔗糖30g、活性炭3～5g、琼脂6～8g,在pH值为5～7.0条件下培养，培养周期：55～65天，培养温度：25～28℃，光照时间:10～24小时/天，光照强度1000～15001x；

五、原球茎分化培养：将经过步骤四增殖培养的原球茎转入下列分化培养基中，所述的分化培养基为：在每升KC培养基中加入NAA 0.8～1.0mg、KT 0.1～0.5mg、VC 10～30mg、VB ₂5～20mg、活性炭3～5g、重量百分比浓度为10～15％的香蕉汁100～150g、琼脂6～8g，在温度25～28℃、光照强度1000～15001x、光照时间10～12小时条件下培养55～65天，得到分化苗；

六、壮苗和生根培养：将分化苗转入下列生根壮苗培养基中，所述的生根壮苗培养基为：在每升1/2KC培养基中加入NAA 0.8～1.0mg、VC 10～30mg、VB ₂ 5～20mg、活性炭3～5g、重量百分比浓度为10～15％的香蕉汁100～150g、琼脂6～8g，在温度25-28℃、光照时间10～12小时、光照强度1000～15001x条件下培养55～65天，得到生根苗。