[发明专利]西南远志的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域，主要涉及的是西南远志的组织培养方法。

背景技术

西南远志(Polygala crotalarioides Buch.Ham.)，又名西藏远志，别名：娘母良、丫磨娘，系远志科远志属植物。是云南佤族民间的一种珍奇中草药，生长在“稀树高草群落”和灌丛草坡，为多年生宿根铺散草本，有增进食欲、强筋健骨和性功能亢进之功。长期服用能使眉须秀长，有颜容光泽和痣斑消褪之效。“斗牛竞赛”，丫磨娘可用作“发力药”喂饲斗牛，使膂力倍增，斗志昂扬。本品性温，味辛甘苦；归入心、肺、肾、肝诸经。具有补肾助阳、养心安神、祛痰解痉的功效。主治瘰疬痨伤、风湿麻木、顺气化痰、补心安神、活血止痛诸症。临床应用于肾虚阳萎、早泄等性功能减退症以及心悸怔忡，肾虚咳喘，宫寒带下等证。药理实验的结果表明，西南远志还具有明显的抗疲劳、抗缺氧作用，能提高机体的抗应激能力，增强体力并使机体适应各种不良刺激的影响。目前从本属植物中分离得到的主要成分为三萜皂苷类化合物、呫吨酮苷类化合物、寡糖脂类化合物、生物碱及其他有机成分和无机物。作为远志属植物的主要化学成分之一的三萜皂苷类化合物，根据张平夫李明炬孙学惠的《佤族草药“丫磨娘”强壮作用的药理研究》证明其具有明显促进幼龄雄性小鼠的睾丸发育和去势雄性大鼠已萎缩之副性腺器官的生长，能够显著增强小鼠游泳耐力、常压耐缺氧以及抗低温能力。“丫磨娘’能够提高机体的抗应激能力，并具有雄性激素样作用。

由于药效卓著，人们争相采挖，已经造成原产地资源的严重枯竭，己濒临绝迹。因此，为保护这一珍稀中药品种，对西南远志进行快速繁殖技术的研究是亟待解决的重要课题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简单、成本低廉、成活率高、生根率高的西南远志的组织培养方法。

本发明所述的西南远志的组织培养方法由以下步骤组成：

一、外植体的选择：选择健壮的野生西南远志，用其种子作为外植体；

二、外植体的消毒：先用自来水冲洗外植体8～12min，然后采用无汞消毒法用60～75％的乙醇溶液消毒30～60秒，用无菌水冲洗3～5遍，按重量比例1:2～2.5将高锰酸钾和甲醛溶液放入玻璃干燥器的底层，随即把外植体放入玻璃干燥器隔层瓷板上，盖好盖子熏消毒1～2小时，再用浓度为3～6％的次氯酸钠消毒10～15min，消毒完成后，再用无菌水冲洗4～6遍；

三、初始诱导培养：把外植体接种于下列经改良的无菌诱导培养基中，所述的改良的无菌诱导培养基为：在每升KC培养基中加入KT1.0～1.5mg、NAA0.4～0.8mg、VB₂5～20mg、活性炭1～1.5g、重量百分比浓度为10～15％的马铃薯汁100～150g，在温度25～28℃、光照强度1000～15001x、光照时间为10～12个小时的条件下，培养55～65天，形成圆球茎；

四、原球茎增殖培养：将上述的生长良好的圆球茎转接入下列增殖培养基中，所述的培养基为：在每升KC培养基中加入NAA1.5～2.0mg、KT0.5～0.8mg、VC10～30mg、VB₂5～20mg、重量百分比浓度为10～15％的马铃薯汁100～150g、蔗糖30g、活性炭3～5g、琼脂6～8g,在pH值为5～7.0条件下培养，培养周期：55～65天，培养温度：25～28℃，光照时间:10～24小时/天，光照强度1000～15001x；

五、原球茎分化培养：将步骤四所述的圆球茎转入下列分化培养基中，所述的分化培养基为：在每升KC培养基中加入NAA0.8～1.0mg、KT0.1～0.5mg、VC10～30mg、VB₂5～20mg、活性炭3～5g、重量百分比浓度为10～15％的香蕉汁100～150g、琼脂6～8g，在温度25～28℃、光照强度1000～15001x、光照时间10～12小时条件下培养55～65天，得到分化苗；

六、壮苗和生根培养：将分化苗转入下列生根壮苗培养基中，所述的生根壮苗培养基为：在每升1/2KC培养基中加入NAA0.8～1.0mg、VC10～30mg、VB₂5～20mg、活性炭3～5g、重量百分比浓度为10～15％的香蕉汁100～150g、琼脂6～8g，在温度25-28℃、光照时间10～12小时、光照强度1000～15001x条件下培养55～65天，得到生根苗。