[发明专利]一种测定rhCNB含量的方法有效
| 申请号： | 201511015899.5 | 申请日： | 2015-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN105506060B | 公开（公告）日： | 2017-05-24 |
| 发明（设计）人： | 周湘龙;黄宗文;麦有觉;董伍爱 | 申请（专利权）人： | 海口奇力制药股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/42 | 分类号： | C12Q1/42 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 570216 海南省*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 测定 rhcnb 含量 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种测定rhCNB含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：取rhCNB粗品，与还原剂混合发生还原反应，制得供试品溶液；
步骤2：取所述供试品溶液、已经标定的rhCNB对照品分别经高效液相色谱测定，按照外标法以峰面积获得rhCNB的含量；
所述还原剂为还原型DTT、还原型谷胱苷肽、β-巯基乙醇、硼氢化钠或亚硫酸氢钠中的一种或两者以上的混合物；
所述还原反应的反应温度为80℃～100℃，所述还原反应的反应时间为15～60min；
所述还原剂的使用量至少为所述rhCNB粗品的蛋白量的1％(w/w)；
所述高效液相色谱采用凝胶柱，以含异丙醇的磷酸盐缓冲液pH7.0溶液为液动相；
所述流动相的流速为0.7mL/min；
所述高效液相色谱的检测波长为280nm；
以g/mol计，所述rhCNB粗品与所述还原剂的质量摩尔比为6:0.08。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述还原反应还需碱性环境；所述碱性环境包括添加金属氢氧化物、强碱弱酸盐、TRIS生物碱或碱性氨基酸中的一种或两者以上的混合物。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液的浓度为0.6mg/mL。
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