[发明专利]一种快速获得三七圆斑病菌分生孢子的活体接种产孢方法

权利要求书

1.一种快速获得三七圆斑病菌分生孢子的活体接种产孢方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：病原菌的培养:无菌条件下，用打孔器分别打取槭菌刺孢单孢菌株的菌饼接种至培养基上，置于一定温度下光照培养箱中全光照连续培养15d，以供产孢接种使用；

步骤2：产孢装置：挑选健康无病的一年生三七植株，用75％乙醇进行喷雾表面消毒，再用无菌水冲洗干净，将消毒好的三七植株移栽至盛有灭菌基质的育苗盆中，接种后用能够将容器和植株一同罩住的自封袋袋口朝上套上即可，小型喷雾器喷雾保湿后，密封好自封袋的袋口；

步骤3：接种叶片：取按照步骤一培养好的纯培养菌株，用打孔器打取的菌饼，在步骤二的叶片中央用无菌针刺伤一个小点，将打好的菌饼移至已刺伤的叶片中央，用无菌水对已接种的叶片进行喷雾保湿，置于20℃光照培养箱中，全光照培养，持续保湿；

步骤4：分生孢子的诱导：2-3d以后，当菌丝侵染叶片形成明显肉眼可见的病斑后，随即去除菌饼，继续喷雾保湿，于接种后6d开始在病斑处产孢，10d后每个叶片上产生的分生孢子达10⁴个左右，分生孢子产生后若要使用应及时将其用无菌水洗下，每个产孢的叶片用移液器吸取1mL无菌水进行冲洗即可，每个叶片可得到1mL的分生孢子悬浮液。

2.根据权利要求1所述的快速获得三七圆斑病菌分生孢子的活体接种产孢方法，其特征在于：所述步骤1中的培养基为PDA培养基、V8汁培养基、胡萝卜培养基、麦芽浸膏培养基、三七煎汁培养基中的一种或几种混合物。

3.根据权利要求1所述的快速获得三七圆斑病菌分生孢子的活体接种产孢方法，其特征在于：所述步骤1中的温度条件为4℃、8℃、12℃、16℃、18℃、20℃、22℃、24℃、28℃或32℃。

4.根据权利要求1所述的快速获得三七圆斑病菌分生孢子的活体接种产孢方法，其特征在于：所述步骤1中的打孔器孔直径为5mm。