[发明专利]一种17α-羟孕酮的化学发光检测试剂盒及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物物质检测的技术领域，具体涉及一种17α-羟孕酮的化学发 光检测试剂盒及其制备方法，以及应用该试剂盒检测17α-羟孕酮的方法和装置。

背景技术

17α-羟孕酮(17α-Hydroxyprogesterone，17α-OHP)是肾上腺皮质激素生物合 成过程中一种重要的小分子中间产物。正常肾上腺以胆固醇为原料合成糖皮质激 素、盐皮质激素、性激素(雄、雌激素和孕激素)三类主要激素，都是胆固醇的衍 生物，其过程极为复杂，每一步骤都要经过一系列酶催化。这些酶包括21-羟化酶、 11β-羟化酶、3β-类固醇脱氢酶、17α-羟化酶等。17α-羟孕酮可以在17-α羟化酶作 用下由孕酮转化，或者在3β-类固醇脱氢酶作用下由17-α羟孕烯醇酮转化，主要产 于肾上腺皮质，部分产生于性腺。血清中的17α-羟孕酮主要与性激素共同作用， 促进个体器官的发育。

类固醇21-羟化酶由CPY21A2编码，也称为CYP21或P450c1，是位于肾上腺皮 质内质网的一种细胞色素P450酶，它能催化17-羟孕酮转化11-脱氧皮质醇，孕酮 转化为去氧皮质酮。21-羟化酶活性的减少或缺失将阻碍皮质醇的合成皮质醇合成 不足，血中浓度降低，由于负反馈作用刺激垂体，分泌促肾上腺皮质激素(ACTH) 增多，刺激性肾上腺皮质增生并分泌过多皮质醇前身物，某些前体可转化为雄激 素，而发生一系列临床症状。检测17α-羟孕酮的测定主要用于新生儿先天性肾上 腺皮质增生症(CAH)的筛查和诊断，防止新生儿肾上腺危象、休克及其后遗症 的产生，降低死亡率，防止女性男性化，减轻过量雄激素作用的后果(包括最终导 致身材矮小、性别不明及性心理障碍等)。17α-羟孕酮的测定也用于分析男性和女 性的普通痤疮、男性秃顶以及一些不明原因的不育症。

近年来，17α-羟孕酮的测定方法主要有时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA) 和酶联免疫吸附试验法(ELISA)。时间分辨荧光免疫测定(TRFIA)是一种非同位 素免疫分析技术，它用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特 点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，其 主要缺陷是荧光的产生需要激发光激发，显著增加仪器成本；产生的激发荧光寿 命短，长度仅有几十个纳秒；荧光信号的信躁比高，非特异增加；产生的荧光信 号属不可见光波长范围，探测困难。而酶联免疫吸附试验法(ELISA)的测定原 理是采用竞争法进行测定，以微孔板包被17α-羟孕酮的一株多克隆抗体，样本中 的17α-羟孕酮抗原和标记有辣根过氧化物酶的17α-羟孕酮抗原竞争结合微孔板 包被的抗体。但是，该技术方案存在三大缺点：(1)采用上述竞争法时标记抗 原与待测抗原均为液相，与固相抗体的结合机会相同，当待测样本中17α-羟孕酮 抗原浓度较低时，灵敏度差；(2)17α-羟孕酮抗原为一种小分子，将抗体固相化 容易造成一些结合位点被掩盖或被改变,使其检测易受到干扰，亲和力下降；(3) 酶联免疫吸附试验法检测时间长，至少需要6个小时，甚至过夜反应才能完成测 试，效率低，且由于酶易受外部干扰因素影响，如温度、时间及材料浓度影响， 导致其稳定性差，进而检测时特异性低，灵敏度差。

发明内容

为解决上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种17α-羟孕酮 的化学发光检测试剂盒，利用17α-羟孕酮抗原与蛋白载体偶联而成的衍生物包被 磁球，后与标记化学发光标记物的17α-羟孕酮抗体特异性结合，准确且高灵敏的 测定待测样本中的17α-羟孕酮含量。

本发明的目的还在于提供一种上述试剂盒的制备方法，包括使用所述17α-羟 孕酮抗原与蛋白载体形成的衍生物包被磁球。利用17α-羟孕酮抗原小分子与蛋白 载体连接形成的偶联物来包被磁球，旨在对小分子抗原进行衍生放大，提高后续 检测17α-羟孕酮的准确度和灵敏度。

本发明的目的还在于提供一种检测待测样品中17α-羟孕酮抗原的方法，包括 通过直接化学发光免疫法使用上述试剂盒对待测样品中的17α-羟孕酮抗原浓度进 行检测。相对于酶免吸附试验法，采用直接化学发光免疫分析法不仅缩短检测时 间、适于大批量检测，也避免了由于酶的不稳定性导致特异性低、灵敏度差的问 题，且通过包被磁球的固相抗原与待测样品中的液相抗原竞争液相抗体的相对结 合率的差异，提高待测样品中低浓度17α-羟孕酮抗原的检出率。