[发明专利]胸苷激酶1的荧光免疫层析检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种胸苷激酶1的荧光免疫层析检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)探针固定垫制备：将胸苷激酶1单克隆抗体按比例与活化白蛋白 荧光胶乳微粒偶联反应制得胸苷激酶1单克隆抗体荧光胶乳微粒，再将所述胸 苷激酶1单克隆抗体荧光胶乳微粒与羊抗兔IgG荧光胶乳微粒按一定比例混合 得到混合荧光胶乳微粒，所述混合荧光胶乳微粒用荧光探针微球稀释液稀释后 喷在玻璃纤维上制得探针固定垫；

步骤2)免疫层析试纸条制备：将样品垫、探针固定垫、层析膜、吸水纸 依次贴在PVC衬板上，将所述胸苷激酶1单克隆抗体包被在层析膜的检测线上， 将羊抗兔IgG包被在层析膜控制线上，进而制得免疫层析试纸条；

步骤3)样品稀释液制备：将包括有牛血清白蛋白、表面活性剂、分散剂 和防腐剂的混合物与缓冲液混合均匀制得样品稀释液；

步骤4)样品检验：取血清、血浆或全血样品混合至所述样品稀释液，加 入免疫层析试纸条进行免疫层析反应，层析反应结束后经荧光检测器荧光检测。

2.根据权利要求1所述的胸苷激酶1的荧光免疫层析检测方法，其特征在 于：步骤1)中，所述活化白蛋白荧光胶乳微粒的制备是先将荧光胶乳微粒与 活化剂反应制得活化荧光胶乳微粒，再与白蛋白按比例偶联反应得白蛋白荧光 胶乳微粒，所述白蛋白与活化荧光胶乳微粒的重量比为0.05:100～0.2:100，所 述白蛋白荧光胶乳微粒进一步与活化剂反应制得所述活化白蛋白荧光胶乳微 粒，其中，所述白蛋白的种属包括人、牛、羊或鼠。

3.根据权利要求2所述的胸苷激酶1的荧光免疫层析检测方法，其特征在 于：步骤1)中，所述羊抗兔IgG荧光胶乳微粒的制备是将羊抗兔IgG按比例 与活化荧光胶乳微粒偶联反应制得，所述羊抗兔IgG与活化荧光胶乳微粒的混 合重量比为0.05:100～0.2:100。

4.根据权利要求2所述的胸苷激酶1的荧光免疫层析检测方法，其特征在 于：步骤1)中，所述活化剂包括1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸 盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺，二者重量比为1:6～1:1，所述1-(3-二甲氨基丙 基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与荧光胶乳微粒的重量比为1:100～5:100。

5.根据权利要求1所述的胸苷激酶1的荧光免疫层析检测方法，其特征在 于：步骤1)中，所述胸苷激酶1单克隆抗体与活化荧光胶乳微粒的混合重量 比为0.05:100～0.2:100，所述胸苷激酶1单克隆抗体荧光胶乳微粒和羊抗兔IgG 荧光胶乳微粒相混合的比例2:1～6:1。

6.根据权利要求1所述的胸苷激酶1的荧光免疫层析检测方法，其特征在 于：步骤1)中，将混合荧光胶乳微粒用荧光探针微球稀释液稀释2～6倍，以 2～6ul/cm的速度均匀喷在宽度为0.7～1.3cm的玻璃纤维上，在30～55℃下干 燥2～24h后制得探针固定垫。

7.根据权利要求1所述的胸苷激酶1的荧光免疫层析检测方法，其特征在 于：所述荧光探针微球稀释液为含有蔗糖、牛血清白蛋白和表面活性剂的缓冲 液，所述缓冲液包括PBS缓冲液、Tris缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液中 的一种或几种，所述表面活性剂为吐温20或吐温80。

8.根据权利要求1所述的胸苷激酶1的荧光免疫层析检测方法，其特征在 于：步骤3)中，所述缓冲液包括PBS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、 MES缓冲液、HEPES缓冲液中的一种或几种，所述表面活性剂为吐温20、吐 温80、曲拉通X-100或聚乙二醇，所述防腐剂为叠氮钠或proclin，所述分散剂 为聚乙烯吡咯烷酮10K、聚乙烯吡咯烷酮40K或聚乙烯醇。