[发明专利]双歧杆菌的实时荧光PCR检测方法在审
申请号: | 201511022187.6 | 申请日: | 2015-12-30 |
公开(公告)号: | CN105483250A | 公开(公告)日: | 2016-04-13 |
发明(设计)人: | 何宇平;杨捷琳;肖其胜;袁辰刚;杨惠琴;王敏;姚剑 | 申请(专利权)人: | 上海出入境检验检疫局动植物与食品检验检疫技术中心 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
代理公司: | 上海华工专利事务所(普通合伙) 31104 | 代理人: | 缪利明 |
地址: | 200135 上*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 杆菌 实时 荧光 pcr 检测 方法 | ||
1.一种双歧杆菌的实时荧光PCR检测方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
步骤一:以双歧杆菌标准菌株的DNA为模板,进行荧光定量PCR扩增,获得PCR 扩增产物;
步骤二:检测扩增产物的荧光信号;
其中,用于PCR扩增的反应体系中含有扩增双歧杆菌的特异性引物对和双歧杆菌 的特异性探针,所述扩增双歧杆菌的特异性引物对的序列如SEQIDNO.1和SEQID NO.2所示,所述双歧杆菌的特异性探针的序列如SEQIDNO.3所示。
2.如权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述PCR扩增的条件如下:
反应体系为:2XHRqPCRMasterMix12.5μL,引物各1.25μL,探针0.625 μL,ddH2O7.375μL,DNA模板2μL;
反应的条件为:95℃,5min;95℃,10s58℃,45s,45个循环。
3.一种双歧杆菌的检测试剂盒,其特征在于,含有以下试剂:
(a)扩增双歧杆菌的特异性引物对;
(b)双歧杆菌的特异性探针;
其中,所述扩增双歧杆菌的特异性引物对的序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2 所示,所述双歧杆菌的特异性探针的序列如SEQIDNO.3所示。
4.根据权利要求3所述的检测试剂盒,其特征在于,所述检测试剂盒还包括:
(c)标准参照物。
5.一种如权利要求3或4所述的检测试剂盒的应用,其特征在于,所述检测试 剂盒用于检测食品中添加的双歧杆菌。
6.一种如权利要求1所述的双歧杆菌的特异性引物对和探针,其特征在于,所 述特异性引物对的序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示,所述特异性探针的序列 如SEQIDNO.3所示。
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