[发明专利]一种含阿霉素七肽多孔微球的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于多孔微球领域，特别涉及一种含阿霉素七肽多孔微球的制备方法。

背景技术

由于多肽具有不同的化学结构，可以利用其肽键间氢键作用、静电作用、疏水性作用以及π-π堆积作用等实现分子自组装，自发组合形成具有某种理化性能的分子聚集体或超分子结构。近年来多肽的自组装逐渐成为材料学和生物医学等领域的研究热点，一系列可自组装的离子短肽被发现或者被设计出来，获得了各种各样的自组装结构，包括纤维、膜和水凝胶等。多肽是生物体内固有的生物活性分子，具有良好的生物相容性和降解性,利用多肽自组装技术构建的各种功能性材料在药物控制释放、组织工程支架材料以及基因治疗等领域内有着巨大的应用前景。

盐酸阿霉素(Doxorubicin，DOX)属蒽环类抗肿瘤抗生素，是一种抑制DNA和RNA合成的抗肿瘤药物。其对实体瘤的有效率约达70％，主要用于治疗恶性淋巴瘤、急性白血病、肺癌、乳腺癌、骨及软组织肉瘤、头颈部肿瘤、肝癌、食道癌、胃癌等，抗瘤谱广，应用广泛。然而，盐酸阿霉素也有着传统抗癌药物的不良反应，主要是消化道毒性、骨髓抑制、心脏毒性、脱发等问题，少数患者有发热、肝功能损伤与肌红蛋白尿、红斑以及色素沉着。因此，开发一种具有很好的生物相容性和可降解性，同时又能实现高效载阿霉素及其可控释放的生物材料很有必要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种含阿霉素七肽多孔微球的制备方法，该方法操作简单、反应条件温和，制备得到的载药复合物包封率高，且具有较好的释放特性。

本发明的一种含阿霉素七肽多孔微球的制备方法，包括：

(1)将七肽Fmoc-HP溶于1,1,1,3,3,3,-六氟-2-丙醇溶液中，得到Fmoc-HP溶液；将DOX加入到PTA水溶液中，得到含DOX的混合溶液；DOX的浓度范围为0.1～5mg/ml；

(2)将步骤(1)中DOX的混合溶液加入到步骤(1)中Fmoc-HP溶液中，避光静置，离心，冷冻干燥，得到DOXFmoc-HP/PTA载药复合物，即含阿霉素七肽多孔微球；其中，避光静置的时间为2～24小时，Fmoc-HP和PTA总质量与DOX的质量比为5:1～1:1。

所述步骤(1)中七肽的序列为Fmoc-Ile-Gln-Ser-Pro-His-Phe-Phe。

所述步骤(1)中Fmoc-HP的浓度范围为0.03～0.48M，PTA的浓度范围为0.025×10^-3～0.8×10^-3M。

所述步骤(2)中加入为迅速加入。

所述步骤(2)中离心的转速为10000rpm，离心时间为5～10分钟；离心除去未包裹的DOX。

所述步骤(2)中DOXFmoc-HP/PTA载药复合物分散于PBS缓冲液中，置于透析袋，放入PBS缓冲溶液环境中的溶出仪，于不同时间点取样测吸光度，并补充缓冲液，测试药物释放；其中，所述PBS缓冲液的pH为7～7.5；透析工艺为采用透析袋，内外液均为PBS缓冲液。

所述步骤(2)中DOXFmoc-HP/PTA载药复合物用于L-929细胞培育，测试细胞毒性；其中，在测试细胞毒性的过程中，DOXFmoc-HP/PTA的PBS溶液中含DOX浓度为0～40μM。

有益效果

(1)本发明利用Fmoc-HP和PTA自组装过程中对DOX的化学吸附及物理包裹，制备了含DOX的多肽自组装复合材料，制备方法简单、实验条件温和；

(2)本发明所使用的载体材料本身具有很好的生物相容性和可降解性，所制备的阿霉素七肽多孔微球复合材料药物包封率高；

(3)本发明所制备的阿霉素七肽多孔微球可以通过调控环境的pH值使载体的降解和药物的释放同步进行。

附图说明

图1为实施例1中(a)DOXFmoc-HP/PTA的SEM图；(b)释药20天后的SEM图；(c)DOXFmoc-HP/PTA荧光显微镜照片；

图2为实施例1中DOX在不同质量比下的上载率和包封率图；

图3为实施例2中DOXFmoc-HP/PTA在PBS缓冲溶液环境下DOX的释放曲线图；

图4为实施例3中(a)DOXFmoc-HP/PTA的细胞毒性图；(b)Fmoc-HP/PTA细胞毒性图。

具体实施方式