[发明专利]一种山红叶黄八丈的组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物组培育苗技术领域，具体涉及一种山红叶黄八丈的组培快繁方法。

背景技术

山红叶黄八丈，其拉丁名为Acerpalmatum‘Ki-hachijo’，其植株健壮，叶子较大，呈鲜亮的深绿色，秋天叶子颜色非常特别，夺人眼球的金黄色稍带有玫瑰红，随后变为浅橙色和红色的混合色，可孤植或群植，其植株健壮，生长旺盛。虽然该品种目前没有广泛栽植，但它将会成为一个很受欢迎的园林景观树种，极具观赏价值与经济价值。目前，山红叶黄八丈主要通过播种和嫁接繁殖，但出芽率和成活率都不是很高，繁殖系数低，繁殖周期长，场地要求大，人工成本较高，远不能满足国内对种苗的需求。

因此，如何提高其生产效率，缩短培育时间，降低人工成本，保持优良树种的遗传稳定性，提高其繁殖系数成为目前亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本申请提供一种山红叶黄八丈的组培快繁方法，所用培养基配方简单，组培流程简便，培养时间短，增殖频率高，幼苗整齐，便于后期统一的移栽和种植管理，降低了人工成本，能保证所长出的幼苗植株在形状上的一致性，易于操作，可进行产业化生产。

为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是一种山红叶黄八丈的组培快繁方法，包括以下步骤：

(1)外植体选取及灭菌：切取山红叶黄八丈带芽茎段，采用酒精和升汞灭菌处理后，得外植体；

(2)启动培养：将步骤(1)所得外植体接种到启动培养基中培养3—5周，腋芽生成，所述启动培养基的组成为：MS基本培养基，补充0.01—0.08mg/LIAA、0.1—0.6mg/LKT、10—50g/L蔗糖、1—8g/L琼脂；

(3)增殖培养：切取步骤(2)所得腋芽，接种到增殖培养基中培养6—8周，丛生芽生成，所述增殖培养基的组成为：B5基本培养基，补充0.05—0.25mg/LNAA、0.05—0.25mg/LKT、0.1—1.0mg/L6-BA、100—800mg/LCH；

(4)生根培养：将步骤(3)所得丛生芽分离成单芽，接种到生根培养基中培养3—4周即得山红叶黄八丈无菌苗，所述生根培养基的组成为：1/2B5基本培养基，补充0.1—0.5mg/LIBA。

优选的，所述外植体选取及灭菌的具体操作为：选取山红叶黄八丈幼嫩枝条，去掉叶片，切割成长度为2—3cm的带芽茎段，在无菌操作台上，用75％的酒精处理8—15s，再用0.1％的升汞处理8—13min，无菌水冲洗4—6次，晾干即可。

优选的，所述启动培养基的组成为：MS基本培养基，补充0.015—0.03mg/LIAA、0.15—0.4mg/LKT、20—40g/L蔗糖、2—6g/L琼脂。

更为优选的，所述启动培养基的组成为：MS基本培养基，补充0.02mg/LIAA、0.2mg/LKT、30g/L蔗糖、5g/L琼脂。

优选的，所述增殖培养基的组成为：B5基本培养基，补充0.05—0.15mg/LNAA、0.05—0.15mg/LKT、0.5—0.9mg/L6-BA、300—600mg/LCH。

更为优选的，所述增殖培养基的组成为：B5基本培养基，补充0.1mg/LNAA、0.1mg/LKT、0.8mg/L6-BA、500mg/LCH。

优选的，所述生根培养基的组成为：1/2B5基本培养基，补充0.1—0.3mg/LIBA。

更为优选的，所述生根培养基的组成为：1/2B5基本培养基，补充0.2mg/LIBA。

优选的，所述启动培养基的pH值为6.3—6.7。

优选的，所述启动培养、增殖培养、生根培养步骤中，培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d。

本申请所述MS基本培养基具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养，还能加速愈伤组织的生长，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。

所述B5基本培养基具有较高的钾盐和盐酸硫胺素，但含有较低的铵，而铵这一营养成分可能对有些培养基有抑制生长的作用；其养分的数量和比例合适，能满足部分植物细胞的营养和生理需要，部分植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。

所述1/2B5基本培养基是B5基本培养基大量母液在原有基础上减半，更低的盐浓度有利于植物根系的生长。