[发明专利]一种依诺肝素钠的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种依诺肝素钠的检测方法。

背景技术

依诺肝素钠，作为一种用于预防和治疗深静脉血栓或肺栓塞的抗凝血剂，其产品质量的好坏直接关系着患者的生命安全。

在依诺肝素钠的生产过程中，如果企业的生产工艺不先进或控制水平不高，其产品的质量很可能会产生较大的波动；因此，为了监控依诺肝素钠的产品质量和/或其生产工艺的稳定性，同时，也为了尽可能降低因产品质量波动所带来的经济损失，有必要对生产出来的依诺肝素钠进行检测。

然而，依诺肝素钠的现有检测方法：中国专利CN 102323355 A和CN 104193849 A，对依诺肝素钠进行检测时，需要同时检测10多个色谱峰来评价依诺肝素钠的产品质量，其检测结果无法直观的反映出产品质量和/或其生产工艺的稳定性，而且，它还需要采用程序复杂但分离效果好的梯度洗脱，也不简便。

为了能够使检测方法的结果直观的反映产品质量和/或其生产工艺的稳定性，同时，也为了使检测方法更加简便，需要发明一种检测依诺肝素钠的新方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种依诺肝素钠的检测方法。

本发明提供的一种依诺肝素钠的检测方法，它包括以下步骤：

a、取依诺肝素钠样品，加入酸水溶液，于110℃～120℃下水解反应6～8小时后，除去酸，加入水，过滤，得到样品水解溶液；

其中，依诺肝素钠样品与酸水溶液的重量体积比为1：0.5～2mg/mL，依诺肝素钠样品与水的重量体积比为1：80～100mg/μL；

b、取样品水解溶液，加入氢氧化钠水溶液和衍生化试剂醇溶液，于70℃～80℃下反应60分钟～90分钟后，冷却，用盐酸调节至溶液呈中性，加入三氯甲烷，振荡，离心，取水相的上清液，作为待检溶液；

其中，样品水解溶液与氢氧化钠水溶液的体积比为1：0.8～1.5；样品水解溶液与衍生化试剂醇溶液的体积比为1：0.8～1.5；

c、采用高效液相色谱方法对待检溶液进行检测，检测条件如下：

反相色谱柱：C18柱或C8柱，

流动相：磷酸盐缓冲液-乙腈，磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为70:30～95:5，

检测波长：220nm～270nm；

检测得到葡萄糖胺与甘露糖胺的峰面积，按照以下公式：

计算得到葡萄糖胺与甘露糖胺的比例。

进一步的，步骤a中，所述酸水溶液的浓度为1.5～2.5mol/L；优选的，所述酸水溶液的浓度为2mol/L。

进一步的，步骤a中，所述的酸水溶液为三氟乙酸水溶液或氢氟酸。

进一步的，步骤b中，所述氢氧化钠水溶液的浓度为0.2mol/L～0.5mol/L，所述衍生化试剂醇溶液的浓度为0.2mol/L～1mol/L；优选的，所述氢氧化钠水溶液的浓度为0.3mol/L，所述衍生化试剂醇溶液的浓度为0.5mol/L。

进一步的，步骤b中，所述的衍生化试剂醇溶液为1-苯基-3甲基-5-吡唑啉酮的醇溶液、2-氨基吡啶的醇溶液、乙基-4-氨基安息香酸盐的醇溶液、2-氨基苯甲酸的醇溶液或1,2-二氨基-4,5-亚甲基双氧苯的醇溶液；优选的，所述的衍生化试剂醇溶液为1-苯基-3甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液。

进一步的，步骤c中，C18柱为Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱，长度为150mm，内径为4.6mm，填料的粒径为5μm。

进一步的，步骤c中，磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为85:15。

进一步的，步骤c中，磷酸盐缓冲液是按照以下方法配制而成：取0.05～0.2mol/L的磷酸氢二钠水溶液，用磷酸调节pH值为6.0～7.0，即得。

进一步的，步骤c中，磷酸盐缓冲液是按照以下方法配制而成：取0.1mol/L的磷酸氢二钠水溶液，用磷酸调节pH值为6.7，即得。

进一步的，步骤c中，检测波长为245nm；柱温为30℃；流速为1mL/min；进样体积为20μL。

本发明检测方法，通过检测葡萄糖胺与甘露糖胺的比例，不仅可以直观的反映出产品质量和/或其生产工艺的稳定性；而且，本发明检测方法简便，无需采用复杂的梯度洗脱程序，就可以实现对依诺肝素钠的准确检测，为监控依诺肝素钠的产品质量和/或其生产工艺的稳定性提供了一种简单易行的新方法。