[发明专利]一种基于酵母菌实时在线分析大气颗粒物毒性的方法

权利要求书

1.一种实时在线分析大气颗粒物毒性的方法，包括如下步骤：

1)筛选出对外界不同刺激有灵敏应激响应的酵母菌不同功能蛋白，并获得所述功能蛋白被绿色荧光蛋白标记的不同酵母菌；

2)将步骤1)获得的不同功能蛋白标记的酵母菌的菌液分别通入微流控芯片的不同通道中作为生物传感器；

3)采集大气颗粒物，并将其混入酵母菌的液体培养基中，实时通入微流控芯片中，观测微流控芯片中不同功能蛋白标记的活体酵母菌绿色荧光的强度变化；

4)对荧光的强度随时间变化数值进行记录和定量分析，在蛋白分子水平实时评估大气颗粒物的毒性。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)从酵母菌功能蛋白的开放数据库筛选出下述44种与氧化应激响应、DNA损伤修复和/或重金属损伤修复相关的功能蛋白：YHR174W、YLR259C、YOR374W、YCR012W、YLR355C、YLL024C、YAL005C、YAL038W、YLR354C、YOR136W、YMR303C、YNL055C、YBR072W、YGR254W、YBL015W、YLR034C、YPL060W、YLL015W、YDR135C、YGR281W、YDR270W、YKL064W、YGL167C、YOL130W、YDR205W、YMR301C、YMR058W、YEL065W、YHL040C、YFL041W、YMR319C、YMR177W、YOR334W、YBR207W、YMR243C、YOR316C、YLR130C、YPR124W、YER145C、YGL255W、YGR257C、YBR290W、YJL133W、YKR052C。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述微流控芯片为高通量微流控芯片，拥有96个不同的通道，最多能够同时通入96种不同酵母菌的菌液。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)将酵母菌菌液通入微流控芯片中后，观测荧光强度作为空白对照。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)利用大气颗粒物采样器将大气中的颗粒物从气相环境采集到酵母菌的液体培养基中，然后通入微流控芯片中。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤3)利用蠕动泵将含有大气颗粒物的液体培养基送入微流控芯片中。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)利用倒置荧光显微镜和CCD照相机同时观察微流控芯片中不同功能蛋白标记酵母菌随时间发出的绿色荧光的强度变化。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤3)将CCD照相机与电脑显示器相连，通过电脑显示器观看CCD照相机所拍到的图像。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)利用NIS-Elements AR软件读取记录下的荧光强度数值，针对每种功能蛋白，对其酵母菌的荧光变化量进行定量分析，进而对大气颗粒物的毒性进行评价。