[发明专利]检测OSTC基因mRNA的可变腺苷酸位点使用情况的引物及方法

权利要求书

1.一种检测OSTC基因mRNA的可变腺苷酸位点使用情况的引物，其特征在于，所述引物包括第一对引物和第二对引物，其序列与OSTC基因3’非翻译区中的两对序列或其互补序列相同；

所述第一对引物的序列与OSTC基因3’非翻译区中common区域的部分序列或其互补序列相同，所述第二对引物的序列与OSTC基因3’非翻译区中Extended区域的部分序列或其互补序列相同；

所述第一对引物用于扩增common区域的Proximal片段，所述第二对引物用于扩增Extended区域的Distal片段；

所述第一对引物的序列如SEQ ID NO：1-2所示或其互补序列，所述第二对引物的序列如SEQ ID NO：3-4所示或其互补序列。

2.一种检测OSTC基因mRNA的可变腺苷酸位点使用情况的非诊断方法，其特征在于，包括以下步骤：

提取样品总RNA，逆转录得到cDNA；

以cDNA为模板，使用第一对引物qPCR扩增common区域的Proximal片段，得到CT值_pro；

以cDNA为模板，使用第二对引物扩增Extended区域的Distal片段，得到CT值_dis；

计算CT值_dis与CT值_pro的比值；

所述第一对引物的序列如SEQ ID NO：1-2所示或其互补序列，所述第二对引物的序列如SEQ ID NO：3-4所示或其互补序列。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述qPCR的反应体系为：

cDNA模板 1μL，

2×qPCR Master Mix 5μL，

上游引物 0.25μL，

下游引物 0.25μL，

无核酸酶水 至10μL。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述qPCR的反应条件为：

预变性：95℃ 1min；扩增：95℃ 5s，62℃ 15s， 72℃ 10s 信号收集，40个循环；溶解曲线：95℃ 1min；冷却：37℃ 1min。