[发明专利]检测OSTC基因mRNA的可变腺苷酸位点使用情况的引物及方法

说明书

本发明公开了检测OSTC基因mRNA的可变腺苷酸位点使用情况的引物及方法。所述引物包括第一对引物和第二对引物，其序列与OSTC基因3’非翻译区中的两对序列或其互补序列相同。所述方法包括以下步骤：提取样品总RNA，逆转录得到cDNA；以cDNA为模板，使用第一对引物qPCR扩增common区域的Proximal片段，得到CT值_pro；以cDNA为模板，使用第二对引物扩增Extended区域的Distal片段，得到CT值_dis；计算CT值_dis与CT值_pro的比值。本发明OSTC基因mRNA的可变腺苷酸位点使用情况的检测方法方便快捷，适合在条件简陋的实验室以及发展中国家得到进一步推广。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，尤其涉及检测OSTC基因mRNA的可变腺苷酸位点使用情况的引物及方法。

背景技术

马立克氏病(Marek's disease,MD)是由马立克氏病病毒((Marek's diseasevirus,MDV)引起的一种禽类高度接触性、传染性、淋巴组织增生性肿瘤病，主要危害鸡，鹤鹑、山鸡也有发病。该病可引起内脏器官、肌肉和外周神经的淋巴细胞瘤的神经肿大。临床上MD发病鸡群表现为生长不均匀、极度消瘦、死亡等症状，最常见的病变是神经损害和多种实质脏器的淋巴肿瘤，以肝脏、脾脏肿瘤最为多见，因神经损害导致的不对称性进行性麻痹，最终可引起单个或多个肢体的完全性麻痹。

MDV属于疱疹病毒科，有三种不同血清型，不同血清型毒株既含有共同抗原，也含有特异性抗原。Ⅰ型MDV感染能引起肿瘤，Ⅱ型和Ⅲ型MDV毒株无致病性，可用于疫苗株。因Ⅰ型MDV感染可引起肿瘤，其检测具有非常重要的意义。目前，临床上最常用鉴别诊断Ⅰ型MDV感染的方法是病毒分离培养、血清学检测、分子生物学方法等。病毒分离鉴定不但对临床诊断很有价值，对流行病学及病原学研究亦至关重要，但该方法检测周期长，约需1～2个月，同时细胞培养的操作要求高，局限性较大。血清学方法如ELISA等主要用于检测羽毛囊上皮、溶细胞感染的淋巴细胞组织及细胞培养物等样品，此类方法检测成本相对较高，并且由于部分病例中病毒血症时间较短，病毒含量低，导致检出率较低。

发明内容

有鉴于此，有必要针对现有技术中检测马立克氏病病毒存在的问题，提供检测OSTC(oligosaccharyltransferase complex subunit,OSTC)基因mRNA的可变腺苷酸位点使用情况的引物及方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种检测OSTC基因mRNA的可变腺苷酸位点使用情况的引物，所述引物包括第一对引物和第二对引物，其序列与OSTC基因3’非翻译区中的两对序列或其互补序列相同。

优选地，所述第一对引物的序列与OSTC基因3’非翻译区中common区域的部分序列或其互补序列相同，所述第二对引物的序列与OSTC基因3’非翻译区中Extended区域的部分序列或其互补序列相同。

优选地，所述第一对引物用于扩增common区域的Proximal片段，所述第二对引物用于扩增Extended区域的Distal片段。

优选地，所述第一对引物的序列如SEQ ID NO：1-2所示或其互补序列，所述第一对引物的序列如SEQ ID NO：3-4所示或其互补序列。

一种检测OSTC基因mRNA的可变腺苷酸位点使用情况的方法，包括以下步骤：

提取样品总RNA，逆转录得到cDNA；

以cDNA为模板，使用第一对引物qPCR扩增common区域的Proximal片段，得到CT值_pro；

以cDNA为模板，使用第二对引物扩增Extended区域的Distal片段，得到CT值_dis；