[发明专利]一种可刺激T细胞扩增的组合物

说明书

技术领域

本发明涉及一种可刺激T细胞扩增的组合物，及使用该组合物对CD8+T细胞进行扩 增的培养方法。

背景技术

艾滋病是目前威胁人类生命安全的重要疾病，而人类免疫缺陷病毒是艾滋病主要 致病因素。现阶段对艾滋病的重要治疗手段是通过鸡尾酒疗法，患者长期服用药物达到控 制病毒和病程的目的。但是鸡尾酒疗法无法完全清除病毒，由于HIV-1的潜伏感染，一旦停 止服药，病毒会迅速反弹。另一方面HIV-1通过高频突变，会逐渐产生耐药性。并且长期服 药，对患者自身也是沉重负担。

研究显示，HIV抗原特异性的CD8⁺T细胞对病毒储存库的控制与清除，发挥了非常 重要作用；并且经过多年探索，现已发现若干针对HIV-1抗原的CD8⁺T细胞克隆，杀伤病毒感 染细胞的能力尤其突出。所以将艾滋病患者体内HIV-1抗原特异性的CD8⁺T细胞分离，经过 体外扩增后，再回输患者体内进行过继性免疫治疗可作为功能性治愈艾滋病的候选方案之 一，但是现行方案还有诸多问题有待解决，需要进一步优化完善。

一方面，所有的病毒和细菌都感染都会携带关键蛋白质抗原表位，免疫系统会将 完整的这些表位为“外源物质”，由此触动免疫攻击。最近研究显示，如果艾滋病患者启动抗 病毒治疗较晚，感染后不久HIV可快速改变这些“标记”区域，所以患者体内携带着的病毒储 藏库几乎完全是由携带逃逸突变的HIV-1所构成，此时病毒蛋白的一些关键部分发生的氨 基酸转变使得它们变得难以被免疫系统识别。

2015年，来自RobertF.Siliciano团队的邓凯博士通过深度测序，发现若干CD8⁺T 细胞识别的抗原表位，其对应HIV-1感染细胞未发生逃逸突变。并且首次从患者处分离出了 杀伤性T细胞，将它发生们与未突变HIV-1抗原多肽混合培养，发现用非突变HIV-1多肽混合 物预处理的CD8⁺T细胞启动了对患者HIV-1感染细胞的强烈反应，具有高达68％的杀伤率。

另一方面，CD8⁺效应T细胞(EffectTcell,Teff)的寿命较短，无法在体内维持长 时间的免疫应答。因此，寿命较长的CD8⁺记忆T细胞(MemoryTcell)正在成为过继性免疫 治疗中的主要细胞，得到越来越多的重视与应用。近年来，干细胞样记忆T淋巴细胞(Tstem cellmemorycells,T_SCM)陆续在小鼠、猕猴等模式生物及人体中被发现。这群细胞处于记 忆细胞的分化上游，经诱导能分化成记忆细胞，同时具有较强的自我更新及抗肿瘤能力。因 此，T_SCM被认为是过继性免疫治疗的重要细胞来源。目前，体外扩增CD8⁺记忆T细胞的方法主 要包括：用Anti-CD3抗体和Anti-CD28抗体体外非特异扩增CD8⁺T细胞；用抗原提呈细胞体 外激活抗原特异性CD8⁺T细胞。用IL-2、IL-7和IL-15扩增CD8⁺记忆T细胞。

发明内容

本发明的目的在于提供可刺激T细胞扩增的组合物，及使用该组合物对CD8+T细胞 进行扩增的培养方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种可刺激CD8+T细胞体外扩增的组合物，其活性因子由Anti-CD3抗体、Anti-CD28抗 体、IL-2、IL-7和IL-21共5种细胞因子组成。优选的，各因子的使用终浓度分别为：Anti-CD3 抗体终浓度0.8～1.2μg/mL、Anti-CD28抗体终浓度0.8～1.2μg/mL、IL-2终浓度8～12ng/ mL、IL-7终浓度8～12ng/mL、IL-21终浓度18～22ng/mL。更佳的，各因子的使用终浓度分别 为：Anti-CD3抗体终浓度1μg/mL、Anti-CD28抗体终浓度1μg/mL、IL-2终浓度10ng/mL、IL-7 终浓度10ng/mL、IL-21终浓度20ng/mL。

特别的，该组合物为CD8⁺T细胞培养基，或者是培养基添加剂。

一种体外扩增CD8+T细胞的方法，包括如下步骤：

收集HIV-1感染患者的外周血单个核细胞PBMC经刺激产生的CD8+T细胞；