[发明专利]浸染条蛋白质印迹法

说明书

提供了采用浸染条分离、固定和/或检测一个或多个样品中分析物的方法、试剂盒和系统。“浸染条”是一种能埋在分离介质中且此后能从中取出的物体，当所述浸染条埋在所述分离介质中时，分析物可固定于所述浸染条上。分离介质的例子包括任意形式的电泳胶和用于柱层析的固定相。本发明方法的实施方式包括：将样品施加于分离介质；令样品中的分析物在所述分离介质中沿分离轴分离；令所述分析物固定到埋于所述分离介质中的浸染条上；从所述分离介质取出所述浸染条；检测固定在该取出的浸染条上的分析物。

相关申请的交叉引用

本申请要求2014年3月11日提交的名称为“浸染条蛋白质印迹法”的美国临时专利申请号61/951,148的优先权，其通过引用纳入本文用于所有目的。

背景技术

电印迹法是一种在生物技术中广泛应用的技术。该技术涉及在其中分布有带电分析物(例如DNA、RNA或蛋白质)的基质上施加电势差。该电势差导致所述分析物迁移出该基质，沉积并固定在与该基质相邻的表面或“斑点”上。然后，通过用一种或多种可检测结合伴侣标记这些分析物，能以荧光、化学发光、反射性或其它现象对其进行检测。

电印迹法常与基于大小或电荷从基质中分离分析物的技术(例如电泳)相结合，并在该技术之后即刻进行。因此，电印迹法提供了基于与电泳相关特性呈正交或互补关系的特性来分析生物样品的一种途径。例如，可在聚丙烯酰胺凝胶中对蛋白质样品进行电泳，然后通过电印迹法将其转移到硝酸纤维素薄膜。蛋白质在凝胶中的迁移速率能反映出其分子量，而这些蛋白质与薄膜上结合伴侣的亲和性则能反映出这些蛋白质是否包含某些序列基序。由于电印迹法在电泳后进行且能保持通过电泳获得的分析物分离情况，在斑点上检测分析物能提供该分析物来源样品的多层次信息。

各种类型的电印迹法在本领域中是已知且实际应用的。当分析物是DNA片段时，将该分析物转移出凝胶或其它基质并转移到斑点内被称为“Southern印迹法”，这是根据其发明者英国生物学家Edwin M.Southern而命名的。类似地，RNA片段的转移被称为Northern印迹法，而蛋白质或多肽的转移被称为Western印迹法(即蛋白质印迹法)。其它的例子还包括用于翻译后修饰的“Eastern”印迹法，以及用于蛋白质相互作用的“Far Western”印迹法。这些印迹技术中的一些可在不施加电势差的情况下进行，而是采用毛细管作用驱动分析物从基质转移到斑点中。

采用常规实施方法进行电印迹法需要经过复杂的过程。在基质中分离分析物后(例如通过电泳)，基质和斑点必须精确并置以易于分析物的转移。然后，必须在基质和斑点周围安装电极和其它设备。该设备可包含缓冲液储器、海绵或湿纸，从而使得电流能在电极间流动。随后，将电势差施加在电极之间，进行转移。然而，为了检测出分析物，必须先拆卸该设备，且必须将斑点从基质中取下并进一步处理。需通过该处理在受控模式下将斑点上的感兴趣分析物与结合伴侣接触。例如，在蛋白质印迹法中，可将斑点与如下物质一起孵育：非特异性结合该斑点的封闭蛋白、特异性结合感兴趣分析物的一抗、结合该一抗的带标记二抗。这些孵育都需要将斑点浸入不同的溶液。随后的检测可涉及将斑点紧邻薄膜放置或紧邻对结合伴侣之一上的标记物敏感的光学扫描仪放置。

电印迹法过程从多个层面上可说是代价昂贵。该过程耗时，在某些情况下可进行数日，且难以自动化。必须以数种不同的方式对斑点进行机械操作，而这些操作需要谨慎以确保例如基质和斑点不会破裂或斑点不会与污染物接触。因此，该过程需要高度熟练、受过全面训练的操作者才能成功执行。就所用试剂而言，电印迹法也非常昂贵。为了能以足够的灵敏度检测分析物，通常将斑点与大大过量的结合伴侣一起孵育，即便这些分析物可能仅占据斑点表面积的一小部分。