[发明专利]制备用于局部施用的脂质体复合物的新方法及使用该脂质体复合物的抗肿瘤剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备用于局部施用的脂质体复合物的新方法及使用该脂质体复合物的抗肿瘤剂。

背景技术

脂质体由构成生物体的细胞膜的磷脂组成，生物相容性高，且能够在生物体内保护药物或活性成分免受分解酶等的同时进行运送，作为药物递送系统的有用工具而备受关注。

另一方面，引起RNA干扰(以下，描述为“RNAi”)的RNAi分子作为用于治疗肿瘤等的有用的工具备受关注，开发了能够抑制肿瘤的增殖的各种RNAi分子。另外，开发了使用由RNAi分子和脂质混合物构成的复合物(脂质体复合物)、将作为活性成分的RNAi分子递送到肿瘤细胞的方法(非专利文献1-3)。

本发明人等迄今为止开发了将涉及肿瘤的增殖的胸苷酸合成酶(以下，描述为“TS”)作为靶的RNAi分子(专利文献1)，报道了：使用将该RNAi分子负载于由规定的比例构成的阳离子性脂质混合物的复合体(脂质体复合物)，例如通过静脉内施用并递送至肿瘤，由此可以抑制表达TS的肿瘤的增殖，进一步通过将该脂质体复合物与化疗剂并用，可以提高对肿瘤的靶向作用，显著地提高RNAi分子引起的抗肿瘤效果(专利文献2)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO2010/113844

专利文献2：WO2012/161196

非专利文献

非专利文献1：Qixin Leng et al.，Drug Future.2009 September；34(9)：721.

非专利文献2：Sherry Y.Wu et al.，The AAPS Journal，Vol.11,No.4，December 2009.

非专利文献3：B.Ozpolat et al.，Journal of Internal Medicine 267；44-53 2009.

发明内容

发明所要解决的课题

在现有的脂质体复合物的制备中，制备脂质混合物的方法包括将作为构成成分的磷脂等预先溶解于氯仿或环己烷等有机溶剂的工序。但是，在利用氯仿或环己烷等有机溶剂的工业制备方法中，需要危险物操作设备或防爆装置等大规模设备。另外，目前在脂质体复合物的制备时，在医院的药剂部门中，在对癌症患者的给药前制备RNAi分子的水溶液，另外，在制备脂质混合物之后，需要将两者进行混合的繁杂的工序，需要大量劳动力。

因此，本发明的目的在于，提供一种脂质体复合物的工业制备方法，其不需要使用大量的氯仿或环己烷等有机溶剂、进一步进行冷冻干燥之后、将生成的脂质混合物分散于水等溶剂中、与RNAi分子的水溶液等混合的繁杂的脂质体复合物制备工序，直接制备通过仅悬浮于水等溶剂而容易地生成脂质体复合物的粉末。

另外，目的在于取消医院的药剂部门中的繁杂且需要大量劳动力的脂质体复合物的配制工序。

用于解决课题的技术方案

本发明人等为了解决上述课题重复进行了深入研究，结果发现：将二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、磷脂酰胆碱及阳离子性脂质溶解于生物相容性高、没有爆炸性的醇，一边搅拌该醇溶液一边滴加于RNAi分子的溶液中之后，将该溶液进行冷冻干燥并除去醇等溶剂，由此可以制备脂质体复合物的冷冻干燥产物。而且，将通过该方法得到的脂质体复合物的冷冻干燥产物在适当的缓冲液中混合，进行对患有癌症的靶器官的局部施用，由此可以有效地治疗该癌症患者。本发明基于上述见解。

本发明如下所述。

[1]一种制备脂质体复合物的方法，所述脂质体复合物含有二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、磷脂酰胆碱及阳离子性脂质以及RNAi分子，所述方法包括：

(a)将二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、磷脂酰胆碱及阳离子性脂质溶解于醇中的工序；

(b)在溶解有RNAi分子的溶液中在搅拌下滴加(a)中得到的醇溶液的工序；及

(c)将(b)中得到的溶液进行冷冻干燥的工序，

所述磷脂酰胆碱具有选自以下的(i)-(iii)中的一个以上的特征：

(i)包含至少一个含有碳-碳双键的不饱和脂肪链；

(ii)包含至少一个含有顺式的碳-碳双键的不饱和脂肪链；

(iii)相变温度低于0℃。

[2]根据[1]的方法，其中，阳离子性脂质为O,O’-双十四碳酰基-Ν-(α三甲基铵基乙酰基)二乙醇胺氯化物(DC-6-14)。