[发明专利]用于制备AMG416的方法

说明书

与相关申请的交叉引用

本申请要求于2014年4月3日提交的美国临时申请号61/974,899的权益，所述申请的内容通过引用以其整体结合到本文中。

对序列表的引用

序列表经由EFS以文本文件形式电子提交，该文本创建于2015年4月3日，并且命名为“0419250488seqlist.txt”(2531字节)，所述序列表的内容通过引用以其整体结合到本文中。

发明领域

本公开内容涉及多肽合成领域，更具体地涉及AMG416或其药学上可接受的盐的合成。

发明背景

AMG 416为合成的钙敏感受体的八氨基酸选择性肽拮抗剂。其开发作为患有慢性肾疾病-矿物质和骨病症(CKD-MBD)的血液透析患者中继发性甲状旁腺功能亢进症(SHPT)的静脉内治疗。

AMG 416的盐酸盐具有化学结构：

主链具有7个氨基酸，均为D-构型。侧链半胱氨酸残基为l-构型。AMG 416 (游离碱)的分子式为C₃₈H₇₃N₂₁O₁₀S₂，并且具有1048.3 Da的计算平均分子量。

国际专利出版号WO 2011/014707中描述了AMG 416和用于其制备的方法，所述专利出版通过引用结合到本文中用于任何目的。如国际专利出版号WO 2011/014707中所描述的，AMG 416可通过固相合成从相应的Fmoc-保护的D-氨基酸装配。从树脂切割后，物料可用Boc-l-Cys(NPyS)-OH处理以形成二硫键。Boc基团可然后用三氟乙酸(TFA)去除，所得产物通过反相高压液相色谱（HPLC）纯化并作为TFA盐形式通过冻干法分离。TFA盐可通过进行后续的盐交换程序转换为药学上可接受的盐。这样的程序为本领域所熟知并且包括，例如，离子交换技术，任选随后纯化所得产物(例如通过反相液相色谱或反渗透)。

存在对生产AMG 416或其药学上可接受的盐(例如，AMG 416 HCl)的有效方法，特别地适于商业规模制造的方法的需求。

发明概述

鉴于上述问题，除了别的之外，本公开内容的一个目标为提供用于制备AMG 416，或其药学上可接受的盐的方法。

在第一个方面，提供用于制备AMG 416的方法，所述方法包括：提供具有选自Fmoc-D-Cys(Trt)-D-Ala-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Ala-D-Arg(Pbf)-[树脂] (SEQ ID NO:2)和Ac-D-Cys(Trt)-D-Ala-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Ala-D-Arg(Pbf)-[树脂] (SEQ ID NO:3)的结构的树脂-结合的肽；从固体载体切割肽；和活化切割的肽的D-Cys残基的侧链。

在第一个方面有关的一个或多个实施方案中，切割和活化步骤在同一容器中发生。

在一个或多个进一步的实施方案中，树脂-结合的肽与包含水、三氟乙酸、三异丙基硅烷和二吡啶二硫化物的溶液接触。

在第二个方面，提供用于制备AMG 416的方法，所述方法包括：提供具有Ac-D-Cys(SPy)-D-Ala-D-Arg-D-Arg-D-Arg-D-Ala-D-Arg-NH₂ (SEQ ID NO:4)结构的肽；和使肽与l-Cys接触以产生缀合产物。

在第二个方面有关的一些实施方案中，肽与包含l-Cys和三氟乙酸的水溶液接触。

在第二个方面有关的一些进一步的实施方案中，所述方法进一步包括冻干缀合产物。

在又一些进一步的实施方案中，第二个方面的方法进一步包括使缀合产物与包含异丙醇(IPA)和盐酸(HCl)的水溶液接触，从而产生包含AMG416 HCl的沉淀。

在第二个方面有关的又一个或多个进一步的实施方案中，所述方法进一步包括通过高效液相色谱(HPLC)纯化沉淀。