[发明专利]酶法制备同质的抗体-药物缀合物

权利要求书

1.抗体-药物缀合物，其中抗体通过其上的内源性受体谷氨酰胺残基与缀合部分缀合，其中所述抗体-药物缀合物的Fc区是N-糖基化的，其中所述受体谷氨酰胺残基在位置295，且所述N-糖基化位点在位置297，其中编号是根据Kabat索引，其中所述缀合部分包含：

i)所示的具有甲基澳瑞他汀E MMAE的不可切割接头PEGx，其中X=2、4、6、8、10、12、16、20或24；

ii)

所示的具有MMAE的可切割接头PEG3c；或

iii) 所示的3-臂PEG接头，其中n=7-38和

所示的炔烃-PEG4-MMAE，其中所述3-臂PEG接头和炔烃-PEG4-MMAE通过叠氮基团/炔烃基团反应连接。

2.权利要求1的抗体-药物缀合物，其中所述抗体是人抗体。

3.权利要求1的抗体-药物缀合物，其中所述抗体是人源化抗体。

4.权利要求1-3的任一项的抗体-药物缀合物，其中所述抗体的两条重链均与缀合部分缀合。

5.权利要求1-3的任一项的抗体-药物缀合物，其中所述缀合部分是

。

6.组合物，其包含权利要求1-5中任一项的抗体-药物缀合物。

7.权利要求6的组合物，其中所述组合物中至少80％的抗体-药物缀合物中，抗体与缀合部分摩尔比率为1:1或1:2。

8.制备抗体-药物缀合物的方法，所述抗体-药物缀合物中，抗体与缀合部分特异性缀合，所述方法包括：在转谷氨酰胺酶存在的情况下，在足以生成所述抗体-药物缀合物的条件下，使含抗体组合物与所述缀合部分反应，其中所述组合物中至少50％的抗体-药物缀合物的Fc区是N-糖基化的，且其中所述缀合部分与抗体上的内源性受体谷氨酰胺残基缀合，所述受体谷氨酰胺残基在位置295，且所述N-糖基化位点在位置297，其中编号是根据Kabat索引，其中所述缀合部分包含：

i) 所示的具有甲基澳瑞他汀E MMAE的不可切割接头PEGx，其中X=2、4、6、8、10、12、16、20或24；

ii)

所示的具有MMAE的可切割接头PEG3c；或

iii) 所示的3-臂PEG接头，其中n=7-38和

所示的炔烃-PEG4-MMAE，其中所述3-臂PEG接头和炔烃-PEG4-MMAE通过叠氮基团/炔烃基团反应连接，所述转谷氨酰胺酶是工程改造的转谷氨酰胺酶，其是通过将选自以下的缺失突变引入SEQ ID NO:16而获得的：D1-E4、P244-P247和N282-L285。

9.权利要求8的方法，其中所述缀合部分包含PEG3c接头和一个活性部分，并且其中所述方法包括：

a)在转谷氨酰胺酶存在的情况下，在足以生成抗体PEG3c接头中间体缀合物的条件下，使含抗体组合物与所述PEG3c接头反应，其中抗体与PEG3c接头特异性缀合，和

b)使所述中间体缀合物与活性部分反应，由此获得所述抗体-药物缀合物，其中所述组合物中至少50％的抗体-药物缀合物的Fc区是糖基化的，且其中所述缀合部分与抗体上的内源性受体谷氨酰胺残基缀合。

10.权利要求8或9的方法，其中所述转谷氨酰胺酶具有至少90％的纯度。

11.权利要求8或9的方法，其中所述转谷氨酰胺酶和所述含抗体组合物的摩尔比率为10:1至1:10。

12.权利要求8或9的方法，其中所述转谷氨酰胺酶固定在固体支持物上。

13.权利要求8或9的方法，其中所述抗体固定在固体支持物上。

14.权利要求8或9的方法，其中所述抗体是人或人源化抗体。