[发明专利]通过使用三孢布拉霉菌正负菌株混合培养深层发酵制造类胡萝卜素的方法

权利要求书

1.一种通过使用三孢布拉霉菌正负菌株混合培养深层发酵制造从β-胡萝卜素或番茄红素中选出类胡萝卜素并从获得的生物质和/或从发酵液油相获取类胡萝卜素的方法，其特征在于，首先分别预培养正和负菌株至完全形成形态，然后将负菌株接种到生物反应器中并在负菌株指数式增长过程中将正菌株按1:5到1:100的体积比添加到负菌株中以诱导形成类胡萝卜素，两种菌株在18℃至24℃下，均无需调节pH值及氧分压下发酵。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，两种菌株在诱导后，在18℃至24℃下，均无需调节pH值及氧分压下发酵直至形成类胡萝卜素。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在生物反应器中在26℃-30℃下分别单独进行菌株预培养和负菌株培养。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，正菌株按与负菌株体积比1:5到1:20，优选1:5到1:10，添加。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，在22℃下正负菌株共同发酵到形成类胡萝卜素。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，正负菌株共同发酵的培养基包含碳水化合物和有机氮化合物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，淀粉、糖蜜或麦芽汁用做培养基中含糖部分。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其特征在于，正负菌株共同发酵的培养基包含脂类，优选一种或多种油，特别优选一种或多种天然油，非常特别优选天然植物油，特别是例如橄榄油、低芥酸菜子油、玉米油和/或葵花籽油。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其特征在于，在制造番茄红素时向正负菌株共同发酵的培养基添加一种环化酶抑制剂，优选咪唑和/或一种咪唑衍生物。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其特征在于，正负菌株共同发酵时放气速率、搅拌器速度和温度保持恒定。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其特征在于，使用负菌株DSM 2388和正菌株DSM 2387或负菌株ATCC 14272和正菌株ATCC 14271。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其特征在于，将含类胡萝卜素的油相从留下的发酵液中分离。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，含类胡萝卜素油相被过滤。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其特征在于，该方法为连续操作。

15.根据权利要求1至14中一项所述的方法，其特征在于，诱导后重新向发酵液中添加培养基。

16.根据权利要求15所述的方法,其特征在于，加入正菌株诱导发酵料后20小时到60小时的时间段内重新添加培养基。

17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，继续添加培养基，其中优选每一次添加都在前一次添加培养基后24小时到48小时的时间段内。

18.一种包含天然类胡萝卜素的油或油混合物，其特征在于，油或油混合物根据权利要求1至17中任一项所述的方法制造。

19.根据权利要求18所述的油或油混合物，其特征在于，油或油混合物中包含的天然类胡萝卜素的浓度为400mg/l或更大。

20.根据权利要求18或19所述的油或油混合物，其特征在于，油或油混合物具有至少400mg/L的β-胡萝卜素和至少5mg/L的番茄红素。

21.根据权利要求18所述的油或油混合物，其特征在于，油或油混合物包含：

≥0.25mg/L叶黄素，

≥2mg/Lβ-隐黄质，

≥2mg/L番茄红素，

≥3mg/Lγ-胡萝卜素，

≥0.25mg/Lα-胡萝卜素，和

≥30mg/Lβ-胡萝卜素。