[发明专利]检测宫颈中的癌变的方法

权利要求书

1.在经受宫颈癌筛选的女性中，检测由人乳头瘤病毒(HPV)引起的瘤细胞转化的方法，所述方法包括，在取自被检查的患者的宫颈上皮的鳞状-柱状结合处的细胞样本中，检测由蛋白E6与蛋白p53组成的蛋白复合物E6/p53和/或由蛋白E7与蛋白pRB组成的蛋白复合物E7/pRB的存在，其中所述两种蛋白复合物中的至少一种的检出表明，在所检查的患者中，癌变已变得不可逆，通过抗体抗蛋白E6和抗体抗蛋白E7的组合使用，优选抗体抗蛋白p53和抗体抗蛋白pRB的组合使用进行所述检测。

2.如权利要求1所述的方法，其包括蛋白印迹技术所述的下述操作：

a)制备取自被检测的患者的宫颈上皮的鳞状-柱状结合处的细胞样本，并将其置于生理溶液中；

b)从所述样本提取蛋白并且使获得的所述蛋白变性；

c)使由此获得的变性蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳；

d)将从前面操作获得的所述蛋白转移在膜上并且中和所述膜的空位点；

e)通过以下步骤鉴定所述蛋白：将所述蛋白与至少下述抗体孵育：

第一单克隆抗体抗蛋白E6；

第一单克隆抗体抗蛋白E7；

然后与缀合有生物素或信使酶如碱性磷酸酶的第二抗IgG抗体孵育；

f)使来自前面操作的产物进行比色检测或化学发光检测；

其中显示蛋白E6和E7中的至少一种的双反应条带的所述检测的结果表明，在检查的患者中，癌变已变得不可逆，所述双条带包含第一条带和第二条带，所述第一条带与所探寻的蛋白即E6或E7的分子量对应，以及所述第二条带对应的分子量不同于且高于第一条带的各蛋白的所述分子量，所述分子量基本上等于蛋白复合物E6/p53的71kD以及等于蛋白复合物E7/pRB的115,5kD。

3.如权利要求2所述的方法，其中在显示蛋白E6和E7的权利要求2所限定的双反应条带的所述检测中的结果，以较高的安全性表明，在所检查的患者中，癌变已变得不可逆。

4.如权利要求2或3所述的方法，其中在所述步骤e)中，所述蛋白还与下述抗体孵育：

第一单克隆抗体抗蛋白p53；

第一单克隆抗体抗蛋白pRb；

进一步的操作类似于所述第一单克隆抗体抗蛋白E6和抗蛋白E7孵育的情况进行的操作，并且显示蛋白p53和pRb中的至少一种的双反应条带的所述检测的结果表明，在检查的患者中，癌变已变得不可逆，所述双条带包含第一条带和第二条带，所述第一条带与所探寻的蛋白p53或pRb的分子量对应，所述第二条带对应的分子量不同于且高于所述第一条带的各蛋白的所述分子量。

5.如权利要求2-4中任一项所述的方法，其中显示蛋白E6和E7的单一反应条带的所述检测的结果表明，在所检查的患者中，癌变尚未开始或者尚未变得不可逆，所述单一条带与所探寻的蛋白E6或E7的分子量对应。

6.如权利要求5所述的方法，其中未显示蛋白E6和E7的任何反应条带的所述检测的结果表明，在所检查的患者中，没有发生病毒DNA与细胞DNA的整合。

7.如权利要求2-4中任一项所述的方法，其中所述操作e)的第二抗IgG抗体缀合有碱性磷酸酶，以及其中操作f)的所述检测是比色检测或化学发光检测。

8.如权利要求2或3所述的方法，其中所述第一单克隆抗体抗蛋白E6是病毒型HPV16和HPV18的小鼠抗蛋白E6抗体，以及所述第一单克隆抗体抗蛋白E7是病毒型HPV16和HPV18的小鼠抗蛋白E7抗体。

9.如权利要求4所述的方法，其中所述第一单克隆抗体抗蛋白p53是小鼠单克隆抗人蛋白p53抗体，以及所述第一单克隆抗体抗蛋白pRb是小鼠单克隆抗人蛋白pRb抗体。