[发明专利]检测宫颈中的癌变的方法

说明书

描述

发明领域

本发明涉及检测宫颈中的癌变的方法。更具体地说，本发明涉及诊断宫颈癌的一些程序，其整合或替代细胞学的作用领域与分子生物学的作用领域，并且提供用于HPV诱导的宫颈病变的诊断、预后和管理的系统，其采用非常灵敏且特异的分析方法，如蛋白印迹和三明治ELISA，以便检测朝肿瘤性病变的转化已变得不可逆的那些情况。

发明背景

人乳头瘤病毒(HPV)的感染和癌症之间的联系激发了研究者的持续兴趣。HPV感染了鳞状上皮的基底细胞并且诱导良性病变的形成和/或在某些情况下诱导侵略性恶性肿瘤的形成。HPV病毒颗粒由蛋白外壳(衣壳)围绕编码区和非编码区中有组织的环状双链DNA组成。在编码区中，已鉴定了八个早期开放阅读框(ORF)(E1-E8)和两个晚期ORF(L1、L2)。早期ORF编码参与以下的蛋白：增殖期间病毒DNA的复制、病毒基因表达的调控(E2)、病毒的组装(E4)、病毒的永生化和转化(E6和E7-只有处于高风险的HPV时)。只有在细胞分化之后，晚期ORF才被激活并编码病毒衣壳蛋白(L1和L2)。启动子、增强子和其它调控元件位于非编码区的上游调控区(URR)。

所有的HPV类型仅在角质形成细胞(或产生角蛋白的上皮细胞)中发育并繁殖，所述角质形成细胞的分化对于病毒的发育是关键的。当通过上皮层的损伤时，HPV到达并感染位于上皮基底层的角质形成细胞干细胞。在这里，病毒利用细胞的复制机构开始它的复制：其将其自身基因组繁殖若干次，同时保持低病毒负荷(多至50-300拷贝)。当基底的细胞增殖并朝上皮的外层移动时，病毒也同时移动，并持续繁殖，而不进一步扩增其基因组，以便逃脱免疫系统的检测。当宿主的角质形成细胞到达其分化的S期(角质化)时，HPV将其基因组复制多至约1000个拷贝。事实上，在该阶段，病毒释放E6和E7蛋白，这刺激细胞传代至S期(Kadaja M等人，Papillomavirus DNA replication-from initiation to genomic instability.Virology.2009Feb.20；384(2)：360-8)。最后，当角质形成细胞到达表面上皮并死亡时，重新包装为衣壳的病毒基因组离开细胞。

在工业化国家，多亏了Pap试验的宣传以及特别是有组织的筛选程序，宫颈癌是一种被警惕控制的疾病。事实上，这是可以通过对侵袭前病变(宫颈上皮内瘤变，CIN)进行早期检测和处理而进行预防的几种肿瘤疾病之一。通过对取自宫颈的少量细胞进行细胞学检查，确定鳞状上皮中异常(SIL，鳞状上皮内病变)的存在是可能的，将鳞状上皮中的异常分为ASC-US(未明确意义的不典型鳞状细胞)、ASC-H(不典型鳞状细胞-不排除HSIL)、LSIL(低度鳞状上皮内病变)、HSIL(高度鳞状上皮内病变)以及最后是″恶性上皮肿瘤″(这时癌性细胞已经存在)。预计，在35-65岁的年龄组中每三年进行Pap试验筛选可以将侵略性癌症的风险降低90％(IARC Working Group on the Evaluation of Cancer Preventive Strategies.IARC Handbooks of Cancer Prevention Vol.10.Cervix Cancer Screening Lyon:IARC press,2005)。